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欧洲李及其近缘种孢粉学研究 　　摘　要：运用扫描电子显微镜(SEM)系统观察了李属(prunus)欧洲李(P.domestica)及其近缘种共13份试材的花粉形态，并采用平均连锁法(average linkage)对花粉的9个数量性状和2个质量性状进行聚类分析。观察结果显示，供试欧洲李的花粉均为单粒花粉，中等大小，等极，辐射对称，极面观为近圆形或圆形，赤面观均为椭圆形，表面纹饰由不规则条脊和散落于条脊间的穿孔组成，与其近缘种差异显著。花粉具3孔沟环状萌发孔(tri-COlporate)，属N，P4C，类型，仅在耶鲁尔品种观察到个别花粉具4条萌发沟。对孢粉数量指标进行方差分析，结果表明欧洲李花粉形态与其近缘种存在明显的差异。聚类分析将供试材料分为二组，即多倍体组和二倍体组，经分析认为野生欧洲李与黑刺李亲缘关系近，野生欧洲李可能包含了黑刺李的种质，而栽培欧洲李可能由野生欧洲李演化而来。最后根据花粉形态对李属供试种的演化进行了讨论。孢粉资料结合聚类分析是进行李属种间亲缘关系及演化途径研究的有效手段。 　　关键词：欧洲李与近缘种；孢粉学；亲缘关系 　　中图分类号：S6623　文献标识码：A　 文章编号：1009―9980f2010104―526―07 　　 　　花粉的结构是由物种的基因所决定的，不受或受环境影响很小，它和植物的营养器官相比更能反映植物演化上的一般规律。花粉大小、表面纹饰、萌发孔的数目及类型等具有较强的保守性，可以为分类学、系统学和进化关系研究提供重要证据。迄今已在苹果、梨、桃、杏、葡萄、琵琶等果树上得到成功应用。 　　在世界范围内，李属植物作为商品李广泛栽培的包括中国李(Prunus salicina)类型和欧洲李(P如一mestica)，欧洲李因果实形态新颖、风味独特而倍受人们喜爱，但其起源问题至今颇具争议。现今涉及李属植物的孢粉学研究较少，仅限于中国李的个别品种，未见欧洲李花粉形态的研究，我们以广泛栽培的欧洲李品种、世界上首次发现的野生欧洲李及其近缘种为试材，采用戊二醛固定一临界点干燥法制样进行花粉扫描电镜(SEM)观察，目的是明确欧洲李及其近缘种的花粉表面纹饰及特征；探讨欧洲李的起源及亲缘关系，为李种质资源的研究工作提供依据。 　　 　　1　材料和方法 　　 　　1.1　材料 　　供试材料来自辽宁省果树科学研究所国家果树种质熊岳李杏资源圃。包括欧洲李及其近缘种的试材共计13份。试验于2009年4―8月在沈阳农业大学仪器测试中心电镜实验室进行，凭证样本现存于熊岳李杏资源圃实验室。供试材料见表1。 　　 　　 　　1.2　方法 　　1.2.1　试验方法采集大蕾期即将开放的花朵剥取新鲜花药，固定于3％的戊二醛固定液中(在真空条件下进行脱气处理)24h或更长，用0.1mol?L-1的磷酸缓冲液漂洗3次后经30％、50％、70％、80％、90％、100％的乙醇和醋酸异戊脂梯度脱洗各15min，用液化C02在HCP22型(日立公司，日本)临界点干燥仪中进行样品干燥5h，显微镜下刺破花药壁释放花粉，轻弹于粘有双面胶的样品托上，经IB-5离子溅射仪(EIKO公司)喷金处理(喷镀电流：7～8mA，喷镀时间：300s)，在S-450扫描电镜(SEM)(日立公司，日本)下观测、记录。选择有代表性的视野分300x(群体)、2000×(极面观、赤面观、萌发孔面)、4000x(萌发孔孔盖)和5000x(外壁纹饰，即赤道面中央区)进行拍摄(图版)，照片通过扫描在电脑中观察，用Calipers 73 pixels软件进行数量指标测量，每项指标测量数据不少于30个，其中定量指标9个，即极轴长(P)、赤轴长(E)、萌发沟长、萌发沟宽、条脊宽、条脊距、孔径、孔频，P／E值；定性指标4个，即赤面观、极面观、花粉形状、外壁纹饰类型。 　　1.2.2　数据分析数值性状直接取其数值，无序多态性状则采用分解法进行编码闭，将数据标准化，聚类策略采用欧氏距离和平均连锁法(average link―age)，用SPSSl2.0进行聚类分析。描述术语参照《花粉与孢子术语词汇表》闭和《孢粉学手册》。 　　 　　2　结果与分析 　　 　　2.1　花粉总体描述 　　供试材料的花粉均为单粒花粉，等极，辐射对称，中等大小，极轴长(P)22.98～33.01μm，赤轴长(E)29.17～37.39μm，极面观为三角形、钝三角形或圆形，赤面观为椭圆形或圆形，极赤比处于0.79～0.88，按照Erdtman提出P／E比值确定花粉形状分，类的方法，李花粉形状为近扁球形(0.75～0.85)或近球形(0.86～1.14)(表2)。 　　 　　花粉具三条萌发沟，沿极轴方向等间距环状分布，赤道中部沟较宽，两端渐尖；外壁纹饰为平行或弯曲或螺旋状条