鲍曼不动杆菌超广谱β―内酰胺酶及其整合子相关性研究.docVIP

鲍曼不动杆菌超广谱β―内酰胺酶及其整合子相关性研究 　　【摘要】 目的：探讨整合子介导耐药在多重耐药鲍曼不动杆菌中所起的作用。方法：随机选择120株鲍曼不动杆菌为研究对象，其中超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）阳性鲍曼不动杆菌45株为A组，ESBLs阴性鲍曼不动杆菌75株为B组，采用聚合酶链反应（PCR）扩增检测这两组鲍曼不动杆菌的整合酶基因和整合子标志基因，并对这两组扩增产物进行比较分析。结果：A组的intI1整合酶基因和intI2整合酶基因阳性率分别为95.6%（43/45）、88.9%（40/45），类整合子的qacE△1-sul1的阳性率为91.1%（41/45）；B组的intI1整合酶基因和intI2整合酶基因阳性率分别为30.7%（23/75），6.7%（5/75），类整合子的qacE△1-sul1的阳性率为22.7%（17/75）；A组菌株的整合酶基因和整合子标志基因阳性率显著高于B组菌株，差异均有统计学意义（P0.05）。结论：鲍曼不动杆菌的整合子耐药基因与ESBLs密切相关，可通过整合子耐药基因及ESBLs检测防止院内感染的区域性流行。 　　【关键词】 鲍曼不动杆菌； 超广谱β-内酰胺酶； 整合子； 整合酶； 基因 　　中图分类号 R378 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2016）21-0151-03 　　doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2016.21.083 　　鲍曼不动杆菌是重要的条件致病菌，由于临床抗生素的广泛应用和不合理滥用，使鲍曼不动杆菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的耐药性问题日益严重，给临床治疗带来极大困难[1]。鲍曼不动杆菌耐药菌株的快速出现与鲍曼不动杆菌抗生素耐药基因的获得和耐药播散密切相关，其中，在整合酶和整合子作用下，鲍曼不动杆菌捕获外来耐药基因，使鲍曼不动杆菌获得多重耐药性[2]；整合酶和整合子在鲍曼不动杆菌ESBLs多重耐药方面发挥重要作用[3]，为此本研究对笔者所在医院收集的120株鲍曼不动杆菌进行整合酶基因和整合子标志基因进行检测，从而分析整合酶基因和整合子标志基因在ESBLs鲍曼不动杆菌耐药中的作用，现报道如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　随机选择笔者所在医院2013年1月-2015年12月从各类临床送检标本痰中分离的鲍曼不动杆菌120株（已剔除同一部位的重复菌株），鲍曼不动杆菌培养均根据《全国临床检验操作规程》第3版的操作规程，超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）阳性鲍曼不动杆菌45株为A组，ESBLs阴性鲍曼不动杆菌75株为B组。其中，来自男性94株，女性26株；患者年龄20～75岁，平均（42.1±12.1）岁。临床标本分布如下：痰液标本84株、分泌物标本16株、尿液标本10株、血液标本5株和其他标本5株。 　　1.2 方法 　　1.2.1 细菌鉴定和药敏试验 采用西门子MicroScan walkAway-96细菌鉴定及药敏分析系统（由德国德灵诊断产品有限公司提供），对鲍曼不动杆菌进行鉴定及药敏分析，实验操作过程均参照美国临床实验室标准化研究所（CLSI）的标准[4]。质控细菌分别为：大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853和肺炎克雷伯菌ATCC700603为ESBLs阳性质控菌株，均由美国ATCC公司提供；ESBLs菌株检测均参照CLSI标准的双纸片检测试验。 　　1.2.2 整合子设计引物 鲍曼不动杆菌intI1整合酶基因引物为P1：5’-TGGATCGGTCGAATGCGTGTG-3’，P2：5’- 　　GCCTTGATGTTACCCGAGAG-3’，预计扩增片段为198bp。鲍曼不动杆菌intI2整合酶基因引物为P1：5’-CACGGATATGCGACAAAAAGGT-3’，P2：5’- 　　GTAGCAAACGAGTGACGAAATG-3’，扩增产物288bp。鲍曼不动杆菌qacE△1-sul1类整合子基因P1：5’-TAGCGAGGGCTTTACTAAGC-3’，P2：5’- 　　ATTCAGAATGCCGAACACCG-3’，目标产物长度为300bp。应用primer premier 6.11引物设计软件设计引物[5]，均由上海生工生物工程有限公司合成。 　　1.2.3 聚合酶链反应（PCR）检测 PCR扩增试剂盒购自海生工生物工程有限公司，PCR扩增反应体系及参数参考刘彩霞等[6]检测方法。 　　1.3 统计学处理 　　采用SPSS 19.0 for Windows进行数据处理及统计学分析，计量资料以（x±s）表示，计数资料以率（%）表示，采用字2检验，P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　A组的intI1整合酶基因和intI2整合