肠道细菌O多糖结合疫苗生物合成研究-免疫学专业论文.docxVIP

硕士研究生学位论文·中国食品药品检定研究院·2 硕士研究生学位论文·中国食品药品检定研究院·2012 级 万方数据 万方数据 HYPERLINK \l _bookmark0 2.5.3 糖蛋白纯化 39 HYPERLINK \l _bookmark1 2.6 动物实验 42 HYPERLINK \l _bookmark2 2.6.1 301 野生株 LPS、OPS 的银染检测 42 HYPERLINK \l _bookmark3 2.6.2 LPS、OPS 以及纯化后糖蛋白的糖定量 43 HYPERLINK \l _bookmark4 2.6.3 间接 ELISA 法检测血清中抗体滴度 43 HYPERLINK \l _bookmark5 2.6.4 攻毒实验 46 HYPERLINK \l _bookmark6 3 讨论与小结 46 HYPERLINK \l _bookmark7 3.1 糖蛋白的诱导表达 46 HYPERLINK \l _bookmark8 3.2 糖蛋白的纯化 47 HYPERLINK \l _bookmark9 3.3 糖蛋白的存在形式检测 48 HYPERLINK \l _bookmark10 3.4 动物实验 48 HYPERLINK \l _bookmark11 3.5 小结 49 HYPERLINK \l _bookmark12 第二章 霍乱弧菌 93-3 菌株 waaL 基因缺失株的构建 51 HYPERLINK \l _bookmark13 1.材料与方法 51 HYPERLINK \l _bookmark14 1.1 材料 51 HYPERLINK \l _bookmark15 1.1.1 菌株与质粒 51 HYPERLINK \l _bookmark16 1.1.2 主要试剂、主要仪器、培养基及主要溶液的配制 51 HYPERLINK \l _bookmark17 1.2 方法 51 HYPERLINK \l _bookmark18 1.2.1 基本实验方法 51 HYPERLINK \l _bookmark19 1.2.2 霍乱弧菌 93-3 株△waaL 缺失突变株的构建 52 HYPERLINK \l _bookmark20 1.2.3 野生株、基因缺失突变株的相关表型实验 56 HYPERLINK \l _bookmark21 2 结果与分析 56 HYPERLINK \l _bookmark22 2.1 霍乱弧菌 93-3 株△waaL 缺失突变株的构建 56 HYPERLINK \l _bookmark23 2.1.1 PCR 获得 waaL 基因上、下游同源臂 56 HYPERLINK \l _bookmark24 通过 overlap-PCR（搭桥 PCR）的方法获得 waaL 的拼接序列57 HYPERLINK \l _bookmark25 pWM91-waaL 质粒的构建 57 HYPERLINK \l _bookmark26 waaL 突变株的构建 57 HYPERLINK \l _bookmark27 2.2 霍乱弧菌 93-3 野生株、基因缺失突变株生长曲线测定58 HYPERLINK \l _bookmark28 2.3 霍乱弧菌 93-3 野生株、基因缺失突变株生理生化测定59 HYPERLINK \l _bookmark29 3 讨论与小结 60 HYPERLINK \l _bookmark30 3.1 讨论 60 HYPERLINK \l _bookmark31 3.2 小结 62 HYPERLINK \l _bookmark32 结语 63 HYPERLINK \l _bookmark33 致 谢 65 HYPERLINK \l _bookmark34 参考文献 66 HYPERLINK \l _bookmark35 综述 70 HYPERLINK \l _bookmark36 附录 76 3 摘要 痢疾和霍乱都是重要的肠道传染病，其病原体分别为志贺氏菌（Shigella Spp.） 和霍乱弧菌（Vibrio Cholerae）。对痢疾和霍乱的治疗多依赖抗生素，但抗生素的 长期使用会导致细菌的耐药性增加，也容易出现多重耐药菌株。接种疫苗是最经济 和有效的预防手段，但目前还未研发成功预防细菌性痢疾的安全有效疫苗，预防霍 乱也多用针对 O1 群的重组 B 亚单位/霍乱菌体疫苗，O139 群尚无预防性疫苗。开 展多糖结合疫苗的研究具有重要意义。 利用多糖的免疫原性制备的多糖疫苗属于 T 细胞非依赖性抗原，其免疫过程中 没有 T 细胞的参与，也不形成免疫记忆，产生的抗体亲和