富硒大米及富硒酵母中的硒形态分析-生物化学与分子生物学专业论文.docx

II II 富硒大米及富硒酵母的硒形态分析 专 业：生物化学与分子生物学 硕士学位申请者：张 涛 导 师：吴 刚 教授 高愈希 研究员 中文摘要 硒是人体必需的营养元素，在体内发挥着重要的生理、生化功能，如抗氧化、 增强免疫力、抗衰老等。同时硒也属于稀散元素，在地球上的含量少且分布不均， 全世界有 2/3 的地区属于缺硒地带，我国缺硒地区占全国总面积的 2/3，其中 1/3 为世界公认的严重缺硒区。当机体硒水平下降时会影响心肌、肝脏、甲状腺等重 要的生命器官的正常功能，导致多种疾病的发生。我国科学家通过补硒来治疗和 预防克山病、大骨节病等严重危害人们健康的疾病，已取得非常明显的效果。研 究表明每天补充一定量的硒还可以使癌症的发生率和死亡率下降 50%。植物是自 然界硒循环生态链中将无机硒转化为有机硒的关键载体，又是人类硒摄入的重要 来源。由于硒化合物存在形式不同，它们在机体的生物利用度，功能有效性，代 谢过程都会明显不同，因此对于植物中硒形态分析对于指导人们补硒，保障人们 健康有着非常重要的意义。 本文对于富硒大米中的各种蛋白的硒含量进行了测量，根据 Osbrone 对谷物 蛋白质组份分类原则，尝试着采取一种顺序搅拌离心法分离提取大米中存在的四 类蛋白，即清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白。采用电感耦合等离子质谱 （ICPMS）作为硒的检测方法，测定了四种蛋白提取液中各自的硒含量。运用排 阻色谱与电感耦合等离子质谱联用方法对于清蛋白提取液中含硒蛋白组份的分 子量进行了测定，初步分析了清蛋白中含硒蛋白组份的分布。通过蛋白酶解和蛋 白酸水解法释放富硒大米及富硒酵母中结合在蛋白多肽链中的氨基酸，运用反相 离子对色谱和电感耦合等离子质谱联用方法对于酶解液及盐酸水解液中含有的 含硒氨基酸成份进行了定性及定量分析，初步探讨了在富硒大米和富硒酵母中与 蛋白结合的含硒氨基酸形式。 结果表明：富硒大米中的蛋白提取液的硒含量约占富硒大米中总硒量的 73%，由此推测含硒蛋白是富硒大米中硒的主要存在形式，其中谷蛋白提取液中 硒含量占总硒量的 48%，是主要的含硒蛋白形式。对于清蛋白提取液中含硒蛋白 III III 组份的分析，从色谱图中可以看出分子量分别为 17.9 KDa 、12.6 KDa 、8.35 KDa 的蛋白中含有硒元素，分子量为 12.6 KDa 的蛋白含硒量占清蛋白总硒量的 50.2%，是清蛋白提取液中主要的含硒蛋白。分析结合到蛋白中的各种含硒氨基 酸形式表明：富硒酵母中与蛋白结合的主要含硒氨基酸是硒代蛋氨酸，含量约占 总硒量的 46%；在富硒大米的酶解液中，只测定出硒代半胱氨酸，未检测到硒代 蛋氨酸的存在，另外还检测出一种与硒代蛋氨酸保留时间相近的未知物质，可能 是氧化的硒代蛋氨酸形式，但需要做进一步准确鉴定及分析。 本文对于富硒大米中的四类蛋白含硒量测定和清蛋白中含硒蛋白组份分布 的分析以及富硒大米中与蛋白结合的含硒氨基酸的检测结果可为今后进一步研 究硒在大米蛋白中的结合形态以及评价大米蛋白的生理功能和营养价值提供重 要参考。 关键词：富硒大米；富硒酵母；硒含量；排阻色谱；反相离子对色谱；电感耦合 等离子质谱；联用方法；清蛋白；硒代蛋氨酸． PAGE PAGE IV The selenium speciation analysis in the selenium-rich rice and selenized yeast Major： Biochemistry and molecular biology Zhang Tao Directed by：Prof. WU Gang Prof. Gao Yu-xi Abstract Selenium is recognized as the necessary nutritional element for human health, which perform many important physiological and biochemical function in the body including anti-oxygenic property、improvement of immunity、prevention of human aging etc. Belonging to trace rare element, selenium is distributed rarely and unevenly on the earth. 2/3 of the area in the world lack selenium, so does in China, of which 1/3 is considered to be extremely lack of seleniu