金雀异黄素对缺氧下RPE细胞增殖的抑制作用及机理探讨-眼科学专业论文.docxVIP

南京医科大学硕士学位论文金雀异黄素对缺氧下RPE细胞增殖的抑制作用及机理探讨 南京医科大学硕士学位论文 金雀异黄素对缺氧下RPE细胞增殖的抑制作用及机理探讨 南京医科大学第一附属医院眼科 硕士研究生： 马健 导 师： 袁志兰 副教授 中 文 摘 要 以往的研究证实金雀异黄素能抑制视网膜色素上皮(retinal pigment epitheIium，RPE)细胞的增殖，然而缺氧条件下金雀异 黄素(geni Stein，Gen)对培养视网膜色素上皮(retinal Pigment epithelium，RPE)细胞生长的影响以及可能作用机制还不明确。 本研究以常氧条件为对照，建立人RPE细胞的缺氧模型，Gen分别 以25、5 O、100uM(组)的药物浓度作用于细胞；甲基噻唑基四唑 (methylthiazolyltetrazol ium，MTT)测定法测定24小时细胞活 力(以吸光度A值表示)；流式细胞仪检测各细胞周期细胞生长情 况；免疫印记检测增殖细胞核抗原(PCNA)，细胞周期蛋白DI (CyclinDl)、细胞外信号调节激酶(extracellular signal—regulated kinases，ERKs)、大分子MAPK(big mitogen—activated protein kinases．1，BMKl))、c-Jun氨基末端激酶(c．Jun N．terminal kinase， 南京医科大学硕士学位论文JNK)以废,．p38MAPK的表达。结果表明：与对照组比，缺氧引起细 南京医科大学硕士学位论文 JNK)以废,．p38MAPK的表达。结果表明：与对照组比，缺氧引起细 胞活力，s期细胞数，PCNA、CyclinDl蛋白的表达增加，细胞表现 为增殖。加Gen组细胞活力下降，细胞在G1期和S期被阻滞，PCNA、 CyclinDl蛋白表达下降，细胞增殖被抑制。随着Gen浓度的增高， 活力逐渐降低，PCNA和eyelinDl蛋白表达逐渐下降。缺氧引起 p-ERKl／2蛋白表达下降，Gen组随着Gen浓度的增高p-ERKl／2蛋白 表达增加．但是BMKl、c-jun和p38MAPK的表达以及磷酸化在各组 间均未发现改变。这些结果说明缺氧引起RPE细胞增殖，Gen抑制 了缺氧情况下RPE细胞的增殖作用，Ji．Gen的抑制作用与它的浓度 呈量效关系，Gen主要通过激活ERKl／2途径来发挥抑制增殖的作 用。 [关键词】金雀异黄素；缺氧；增殖；PcNA；cyclinDl；ERK 南京医科大学硕士学位论文Genistein 南京医科大学硕士学位论文 Genistein inhibits the proliferation of RPE cells exposed to hypoxia (Department of Ophthalmology，the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University，Nanjing 210029；1 Postgraduate：Jian MA Tutor Professor：Zhi．1an YUAN Abstraet It is suggested that genistein suppressed the proliferation of RPE cells on normal culture．But the effects and mechanism of Genistein on the proliferation of RPE cells exposed to hypoxia remains unclear．This study is to investigate the them．With the control group，the RPE cells exposed to hypoxia was built up． Different concentration of Gen were added into the anoxic RPE ceils with the last concentration was seperately 25、50、1 00uM．MTT assay was used to evaluate the vital force(indicated by Value A、． The growing conditions of the RPE cells in different phases were analyzed by flow cytometry．The expressions of the proliferating cell nuclear antigen(PCNA)、CyclinD