结核杆菌对感染宿主巨噬细胞凋亡的调控作用及其机制研究-免疫学专业论文.docxVIP

石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明 学位论文独创性声明 本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所 知，除文中已经注明引用的内容外 ，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。 对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。 研究生签名： 时间： 年 月 日 使用授权声明 本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向 国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并 允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论 文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。 研究生签名： 时间： 年 月 日 导师签名： 时间： 年 月 日 目录 中文摘要…………………………………………………………………………………Ⅰ 英文摘要…………………………………………………………………………………Ⅱ 英汉缩略语名词对照 ……………………………………………………………………IV 前 言………………………………………………………………………………………1 1 材 料……………………………………………………………………………………3 2 方 法……………………………………………………………………………………9 3 结 果……………………………………………………………………………………16 4 讨 论……………………………………………………………………………………28 结 论……………………………………………………………………………………32 参考文献…………………………………………………………………………………33 文献综述…………………………………………………………………………………36 致 谢……………………………………………………………………………………43 作者简介 …………………………………………………………………………………44 导师评语 …………………………………………………………………………………45 摘 要 目的： 方法：  构建结核分枝杆菌感染 RAW264.7 巨噬细胞的模型，探讨不同毒力的结核分枝杆菌感 染对巨噬细胞凋亡的调控作用及其机制。 1. 用结核分枝杆菌国际标准强毒株 H37Rv 株和卡介苗 BCG 分别感染巨噬细胞 RAW264.7 株，同时设空白对照组，在感染后 1h、6h、12h 及 24h，用流式细胞技术 检测各组巨噬细胞的凋亡率，分析其时相性变化。 2. 应用 Western blot 和 RT-PCR 技术检测上述各组各时间点 Caspase-3 及 Bcl-2 蛋的表 达水平（蛋白水平和基因水平）。 结果： 1. 结核分枝杆菌感染组的凋亡率显著高于对照组，差异具有统计学意义（P0.05）； BCG 感染组早期凋亡率高于 H37Rv 株感染组，在感染后 1h、12h 和 24h 凋亡率升 高显著，差异具有统计学意义（P0.05）。 2. 结核分枝杆菌感染巨噬细胞后，其 Caspase-3 蛋白表达增高，结核分枝杆菌感染组 的 Caspase-3 蛋白表达高于对照组，对照组＜H37Rv 株感染组＜BCG 感染组，差异 具有统计学意义（P0.05）；BCG 感染组 Caspase-3 蛋白表达高于 H37Rv 株感染组， 在感染后 1h、12h 和 24h 蛋白表达显著增高，差异具有统计学意义（P0.05）。 3. 结核分枝杆菌感染组 Caspase-3 基因相对表达量高于对照组，差异具有统计学意义 （P0.05）；BCG 感染组 Caspase-3 基因表达高于 H37Rv 株感染组，在感染后 1h 和 24h 表达显著增高，差异具有统计学意义（P0.05）。 4. 结核分枝杆菌感染组的 Bcl-2 蛋白表达低于对照组，差异具有统计学意义（P0.05）； H37Rv 感染组在 1h、6h 和 24 h 的 Bcl-2 蛋白表达高于 BCG 感染组，差异具有统 计学意义（P0.05）。 5. 结核分枝杆菌感染组 Bcl-2 基因相对表达量低于对照组，差异具有统计学意义 （P0.05）；H37Rv 株感染组 Bcl-2 基因表达高于 BCG 感染组，在感染后 1h、12h 和 24h 的相对表达显著增高，差异具有统计学意义（P0.05）。 结论： 1. 巨噬细胞感染结核分枝杆菌后凋亡率增高，其凋亡与结核分枝杆菌的毒力强弱有关 ，胞的凋亡水平存在差异，毒力弱的结核分枝杆菌感染的巨噬细胞早期凋亡显著。 2. 不同毒力的结核分枝杆菌感染巨噬细胞的 Caspase-3 表达水平存在差异，弱毒力结核 分枝杆菌感染的巨噬细胞早期的 Caspas