课件：制药工艺学十八维生素的生产工艺.pptVIP

* 目前维生素C的生产主要采用两步发酵法。即以葡萄糖为原料，经高压催化氢化制备山梨醇，然后以山梨醇为原料经两步微生物（黑醋菌、假单孢杆菌和氧化葡萄糖酸杆菌的混合菌株）发酵制备2-酮基-L-古龙酸，再将此酸酸（或碱）转化等工序制得粗品维生素C，粗品维生素C经精制得成品Vc。 18.2.3.3两步发酵的工艺 1 D-山梨醇的化学合成 50%葡萄糖溶液在75℃下加入活性炭，用石灰乳液调节pH8.4，加镍催化剂，通氢气，压力3.43MPa ，反应温度140℃。反应结束后，静置沉降出去催化剂，反应液经离子交换树脂、活性炭处理后，减压浓缩，得到含量60-70%的D-山梨醇，无色透明或微黄色透明粘稠液体，收率约97%。 2 2-酮-L-古龙酸的微生物发酵 第一步发酵：黑醋酸杆菌（从D-山梨醇到L-山梨糖） 第二步发酵：葡萄糖酸杆菌和巨大芽孢杆菌混合培养 发酵罐：气升式反应器，100立方米。 （3） 2-酮-L-古龙酸的分离纯化 发酵液中：2-酮-L-古龙酸8%，杂质有菌丝体、蛋白质和悬浮的固体颗粒等。除杂操作：加热、离心。 　 莱氏法是最早生产维生素C的方法,其以葡萄糖为原料,先经黑醋菌发酵生成L-山梨糖,再经丙酮化及NaClO 氧化、水解得到2-酮-L古龙酸钠,然后进行化学合成得到维生素C。 此法存在着很多缺陷,如生产工艺复杂、劳动强度大、生产环境恶劣、易对人体造成伤害,因此人们不断对此工艺进行改进。 18.2.3.3 二步发酵菌种及发酵工艺 18.2.3.3.1 第一步发酵 A. 菌种 一步发酵中所用菌种为黑醋酸杆菌（Gluconobacter melagenus），简称黑醋菌。 最常用的生产菌株为R-30，其主要特征是：细胞椭圆至短杆状，G+，无芽孢，大小为（0.5～0.8）μm×（1.0～2.2）μm。端生草根鞭毛运动，菌落边缘整齐，微显浅褐色。生长最适温度为30~33℃，氧化D-山梨醇的发酵收率可达98％以上。 B. 培养基 C. 发酵过程特征 在发酵过程中，控制发酵温度34℃，初始pH5.1～5.3。该氧化反应的耗氧量较大，所以通气比要求1:1 VVM以上。即使在通气量较大，且搅拌转速较高的条件下，发酵至4h后溶解氧浓度急剧下降，甚至接近于零。直到10h左右才逐渐回升。当溶解氧浓度回复至最高点，呈水平直线时，表示该反应已达终点。 该发酵过程受山梨醇底物浓度的影响，当其浓度超过250 g/L时，底物对产物形成有抑制作用。故要获得高浓度山梨糖时，必须采用流加发酵方式。为了配合第二步的高浓度山梨糖流加发酵工艺，尽可能提供一步发酵的最终山梨糖浓度是至关重要的。目前山梨糖浓度可达450 g/L 18.2.3.3.2 第二步发酵 菌种 第二步发酵采用的菌种为由大、小两株细菌组成的混合菌种。 小菌为氧化葡萄糖酸杆菌（Gluconobacter oxydans）， 大菌可采用巨大芽孢杆菌（Bacillus megateriam），称2980菌， 或蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus），称152菌， 或浸麻芽孢杆菌（Bacillus macerans），称169菌。 也可采用其他一些杆菌与小菌混合培养。 工业生产过程中使用最多的为2980及152混合菌。 氧化葡萄糖酸杆菌的主要特征为：细胞椭圆至短杆状，G-，无芽孢。30℃培养2d后大小为（0.5～0.7）μm ×（0.6～1.2）μm ，单个或成对排列。在葡萄糖培养基上生长极微弱，甘露醇培养基上生长良好。 B. 培养基 C. 发酵过程特征 第二步发酵为混合菌种发酵。由于大、小菌两者的最适培养条件是不同的，所以其操作适宜条件是兼顾大、小菌两者的条件。通常操作温度为30℃；初始pH控制在6.8左右。该反应虽属氧化反应，但对氧的消耗并不很大。气升式发酵罐非常适合该发酵过程。溶氧浓度控制在20％即可。 山梨糖的初始浓度对产物的生成影响较大。间歇发酵时初始山梨糖浓度超过80 g/L，会对产物生成产生抑制。所以需采用高浓度山梨糖流加发酵方式。若采用建立在数学模型基础上的流加控制策略，二步收率可达83％。 18.2.3.3.3 2-酮基-L-古龙酸的分离原理 山梨醇经两步微生物发酵主要生成2-酮基-L-古龙酸，使发酵液酸度提高，为了保证产酸正常进行，必须定期滴加灭菌的碳酸钠溶液调pH值，使pH值保持7.0左右，这样发酵终点所得溶液是含古龙酸钠及少量古龙酸的发酵液。在发酵终点时，用于发酵的芽孢杆菌菌体已逐步自溶成碎片，使大量的菌体蛋白溶入发酵液中。因此，发酵液中除了含有一定量的2-酮基-L-古龙酸钠及2-酮基-L-古龙酸外，还含有大量的菌体蛋白