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四川道地产区乌头药材不同部位6种生物碱 含量对比探究 摘要目的：研究四川道地产区6种乌头生物碱在 不同部位的分布差异，比较母根、子根基于化学成分的区别。 方法：采用超高效液相色谱法(UPLC)测定19批四川道地 乌头药材母根、子根、须根中6种乌头生物碱含量，并结合 SPSS统计软件对数据进行显著性差异、聚类分析和主成分分 析研究。结果：6种乌头生物碱在3个部位的分布差异各不 相同。母根、子根中苯甲酰新乌头碱、新乌头碱含量有显著 性差异，为两者的差异性指标成分。聚类分析、主成分分析 也将供试样品分成母根、子根两大类。结论：母根、子根的 物质基础有差别，可为临床正确使用提供参考。 关键词UPLC；乌头；母根；子根；乌头生物碱；区别 收稿日期2013-03-15 ［基金项目］国家重大新药创制”科技重大专项 (2013z 通信作者 *冯锋,教授，E-mail： fengsunlight@163. com 作者简介钱长敏，硕士研究生，主要从事药材资源的 研究，Tel: E-mail： qianchangmin@126. com 毛萇科植物乌头Aconitum carmichaelii Debx.为一常用毒 性药用植物。药典收录的相关药材有川乌和附子。两者分别 为乌头的母根和子根［1］。虽然药典已明确了药用部位，但 川乌和附子的混用还是较多。课题组在终端药材市场采购时 发现川乌除有母根之外，许多为小子根，附子的生药材多为 大个子根，这与之前文献报道一致［2］。近年来，已有针对 乌头不同组织的多项研究，包括毒性、化学成分的比较等 ［3-7］ o其中乌头生物碱研究较多，主要比较了总生物碱和3 种双酯型生物碱的差别，但未见有单酯型生物碱的含量差异 研究。四川江油为乌头药材的道地产区，有着悠久的种植历 史，其年产量占了全国乌头药材很大的比重。本文建立了超 高效液相色谱法（UPLC）测定江油多批次乌头样本母根、子 根、须根中6种乌头生物碱含量，比较研究江油6种乌头生 物碱在不同根部的分布差异，同时结合聚类分析（HCA）和 主成分分析（PCA）,系统探讨母根与子根基于6种乌头生物 碱的区别，以期通过多样本量多化学成分来评价四川道地产 区药材质量和根部组织的差异，为已有化学成分研究提供补 充，为母根、子根在临床的正确合理使用提供更多的参考依 据。 1材料 1.1仪器 超高效液相色谱系统（ACQUITY UPLC,美国Waters公 司，包括二元梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、 TUV检测器、Empower2工作站），电子天平（XS205,瑞士 METTLER TOLEDO公司），粉碎机（MF10,德国IKA公司），高 速冷冻离心机（ST16R,美国Thermo公司），平行溶剂蒸发 仪（QT01,瑞士 BUICIT公司），Milli-Q超纯水系统（美国 Millipore 公司）。 1.2药品与试剂 苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头碱、苯甲酰次乌头碱、新 乌头碱、乌头碱、次乌头碱（纯度和批号分别为99. 6%, 111795-200901 ； 96.5% , 111794-201102 ； 99.5% , 111796-200901 ； 100% , 110799-200505 ； 100% , 110720-200410； 99. 5%, 110798-200805；均购于中国食品 药品检定研究院）；乙睛、甲醇（色谱纯，德国Merck公司）; 醋酸铁（优级纯，天津市光复科技发展有限公司）；碳酸氢 铁（优级纯，天津市元力化工有限公司）；醋酸（色谱纯， 天津市康科德科技有限公司）；异丙醇、醋酸乙酯（分析纯, 天津市化学试剂二厂）；氨水（分析纯，天津市化学试剂三 厂）；超纯水（Milli-Q制备）。 1.3药材样本采收 乌头药材样本于2012年6月底（产区采收季）实地采 自道地产区四川江油，在当地不同种植区域共收集19批样 本，主要为根部及与根部相连少部分茎叶。除去泥沙，晒干, 将根部分为母根、子根、须根，备用。19批药材样本经天津 大学药物科学与技术学院高文远教授鉴定，均为毛奠科植物 乌头A. carmichaelii,样品标本保存于天津天士力集团研 究院现代中药研究所，样本信息见表1。 表1 19批乌头药材样本信息 Table 1 The sources of 19 batches of Aconitum carmichaelii 注：每个样本均含有母根、子根、须根。 2方法 2. 1对照品溶液的制备 取苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头碱、苯甲酰次乌头碱、 新乌头碱、乌头碱、次乌头碱对照品适量，精密称定，加0. 1% 醋酸甲醇至刻度，摇匀，制成质量浓度分别为372.8, 61.2, 130, 602.4, 70