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第十单元现代生物科技专题 学案49 DNA重组技术的基本工具和基因工程的基本操作程序 考纲要求 1?基因工程的诞生I 基因工程的原理及技术 II 复习要求 理解基因工程的实质 理解基因工程操作的四步曲及其操作实例 基础自查 技术，赋予生物 O 技术，赋予生物 O基因I ?程是在 基因工程是指 ，通过 以新的遗传特性，创造出 水平上进行设计和施工的，又叫做 。 基因工程的基本工具 限制性核酸内切酶 邙艮制酶) 来源： 。 功能： O 结果：产生的DNA片段末端通常有两种形式： DNA连接酶 ⑴两种DNA连接酶(E-coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶)比较: 相同点： 。 区别： (2)与DNA聚合酶作用的异同: 3 ?载体 (1)载体具备的条件: (2)最常用的是 其它载体： 基因工程的基本操作程序 第一步： 原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有 O 2.PCR技术扩增目的基因 原理： TOC \o 1-5 \h \z 过程：： o 第二步： 目的： 。 组成： (1)启动子： 。 终止子： o 标记基因的作用： Q 第三步： 2?常用的方法： a、 将目的基因导入植物细胞方法： 。 b、 将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 。此方法的受 体细胞多是 。 C、将目的基因导入微生物细胞：最常用的原核细胞是 ，其转化方法是： 第四步： ,方法是采用方法是采用1?首先要检测 ,方法是采用 方法是采用 2.其次还要检测 最后检测 用 有时还需进行 状。 ,方法是 ， O 的鉴定。如转基因抗虫植物是否出现抗虫性 课堂深化探究 对基因工程概念的理解 别名 基因拼接技术或DNA重组技术 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 结果 与杂交育种相比 与诱变育种相比 原理 基因工程的基本操作工具 1.与DNA分子相关的酶 (2)几种酶的比较 项 H 限制酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 解旋酶 作用底物 作用部位 作用特点 作用结果 ⑵限制酶与DNA连接酶的关系 载体 ⑴作用 具备的条件 ⑶种类 特别提醒①一般来说，天然载体往往不能满足人类的所有要求，因此人们根据不同的目 的和需要，对某些天然的载体进行人工改造。 ②限制酶切割位点所处的位置必须是在所需的标记基因之外，这样才能保证标记基因的完 整性，有利于对目的基因的检测。 基因工程操作程序 基因工程技术生产凝乳酶的过程 慕因工程的操作程序分析 目的基因的获取途径 ⑵慕因表达载体的构建 特别提醒 ①插入的目的基因的表达需要调控序列，因而用作载体的质粒的插入基因部位 Z前需有启动子，Z后需有终止子。 ②两次使用的限制酶为同一种酶，这样形成的黏性末端碱基之间互补，便于连接。 (3)将目的基因导入受体细胞(转化) 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 受体细胞 体细胞 受精卵 原核细胞 转化过程 (4) 口的基因的检测与鉴定 类型 检测内容 方法 结果显示  分子 检测 导入检测 转录检测 翻译检测 个体水平检测 特别提醒：1.在整个工程中，只有第三步将目的基因导入受体细胞过程中不发生碱基互补 配对，其他步骤均发生配对。 切割质粒和目的基因的限制酶必须是同一种酶，以获得相同的黏性末端，利于基因表达 载体的构建。 插入的目的基因只是结构基因部分，其表达蛊要调控序列，因而用作载体的质粒的插入 部位前须有启动子，后须有终止子。 PCR技术与DNA复制的比较 PCR技术 DNA复制 相 同 点 原理 DNA双链复制（碱基互补配对） 原料 四种游离的脱氧核昔酸 条件 模板、ATP、酶等 不 同 点 解旋 方式 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化 场所 体外复制 主要在细胞核内 酶 热稳定的DNA聚合酶（Taq酶） 细胞内含有的DNA聚合酶 结果 在短时间内形成大量的DNA片段 形成整个DNA分子 对应训练 1?【解析】①基因工程中有3种工具，但工具酶只有2种。②工具酶本质为蛋白质，载体 本质为小型DNA分子，但不一定是环状。③标记基因的作用一一筛选、检测目的基因是否 导入受体细胞，常见的有抗生素抗性基因、发光基因，表达产物为带颜色物质等。④受体 细胞中常用植物受精卵或体细胞（经组织培养）、动物受精卵（一般不用体细胞）、微生物一一 大肠杆菌、酵母菌等。一般不用支原体，原因是它营寄生生活；一定能用哺乳动物成熟红细 胞，原因是它无细胞核，不能合成蛋白质。 【答案】D 2.解析考查基因工程中工具酚的有关知识。限制性核酸内切酶的化学成分是蛋白质，它的 活性受到温度和pH的影响；限制性核酸内切酶的特点是能识别双链DNA中特定的核昔酸序 列，可在特定的位点进行切割，但不能识别和切割RNA；限制性核酸内切酶主要是从原核生 物体内分离出来的。 答案C 解析 图示过