药典三部(2015版)-通则-3604新生牛血清检测要求.pdfVIP

3604 新生牛血清检测要求 本品系从出生 14 小时内未进食的新生牛采血分离血清，经除菌 过滤后制成。牛血清生产过程中不得任意添加其他物质成分。新生牛 血清应进行以下检查，符合规定后方可使用。 如采用经过验证的病毒灭活工艺处理的牛血清，大肠杆菌噬菌体 及病毒检测必须在灭活前取样进行。 pH 值 应为 7.00～8.50。 蛋白质含量 采用双缩脲法（通则 0731 第三法）或其他适宜方法 测定，应为 35～50g/L。 血红蛋白 用分光光度法或其他适宜的方法测定，应不高于 200mg/L。 以蒸馏水为空白对照，使用 1cm 光路的比色杯，直接测定供试品 在 576nm、623nm 及 700nm 波长下的吸光度值，每个供试品至少测定 2 次，计算平均测定值。按照下式计算供试品中血红蛋白含量： 血红蛋白含量（mg/L）=[(A576×115)－(A623×102)－(A700 ×39.1)]×10 式中 A576 、A623 、A700 为供试品在 576nm、623nm 及 700nm 波长 下的平均吸光度值。 渗透压摩尔浓度 应为 250～330mOsmol/kg （通则 0632）。 细菌内毒素检查 应不高于 10EU/ml（通则 1143凝胶限度试验）。 支持细胞增殖检查 用 Sp2/0-Ag14 或适宜的传代细胞进行。细 胞复苏后，用待测样品配制的培养液至少连续传三代后使用，取对数 生长期的细胞用于试验。 （1）细胞生长曲线的测定 取供试品按 10%浓度配制细胞培养液， 4 按每 1ml 含 10 的细胞浓度接种细胞，每天计数活细胞，连续观察 1周， 6 并绘制生长曲线，细胞的最大增殖浓度应不低于 10 /ml 。 （2）细胞倍增时间的测定 按生长曲线计算细胞的倍增时间。取 细胞峰值前一天的细胞计数（Y）、接种细胞数（X）及生长时间（T）计算。 倍增时间=T/A A=log Y/X 2 细胞的倍增时间应不超过 20 小时。 （3）克隆率的测定 按有限稀释法将细胞稀释至每 1ml 含 10 个活 细胞的浓度，按每孔 1 个细胞接种于 96 孔细胞培养板，每板至少接种 60 孔，于 37℃、5%二氧化碳培养，定期观察细胞克隆生长情况，培养 1 周后计数每孔中的细胞克隆数，并计算克隆率，应不低于 70%。 克隆率=A/B×100% 式中 A 为细胞克隆数； B 为接种细胞的总孔数。 无菌检查 依法检查（通则 1101），应符合规定。 支原体检查 依法检查（通则 3301），应符合规定。 大肠杆菌噬菌体 采用噬斑法和增殖法检测。不得有噬菌体污 染。 病毒检查 细胞培养法及荧光抗体检测 （1）样品制备 取约 250ml 的新生牛血清供试品用于检测，将其 配制成含 15%供试品的培养液，用于检测全过程的细胞换液及传代。 以检测合格的血清作为阴性对照血清。 （2）指示细胞制备 至少采用猴源（如 Vero 细胞）、2 种牛源细胞 （BT 和MDBK 细胞或无病毒污染的原代牛肾细胞）以及人二倍体细胞 作为指示细胞。细胞复苏后至少传代 1 次后使用。根据所需量制备足 够量的细胞。 2 （3）用含有供试品的培养液将 4 种指示细胞分别接种于 75cm 细