细胞生物学第三章细胞生物学研究方法.docx

第三章细胞生物学研究方法 (the research method in the cell biology) 如何学习细胞生物学? 抽象思维与动态观点 结构与功能统一的观点 同_性(unity)和多样性(diversity)的问题 细胞生物学的主要内容： 结构与功能(动态特征)； 细胞的生命活动； 实验科学与实验技术——细胞真知源于实验室 What we know//How we know. 第三章细胞生物学研究方法 (the research method in the cell biology) ?细胞形态结构的观察方法 (study method for cell morphology and structure ) ?细胞组分的分析方法 (analysis method for cell composition) ?细胞培养、细胞工程与显微操作技术 (cell culture,cell engineering and micro-oparation technique) 第一节细胞形态结构的观察方法 ?光学显微镜枝术(light microscopy) (Electron microscopy) ?扫描遂道显邀镜(scanning tunneling microscope) 第二节细胞组分的分析方法 ?离心分离技术 ?细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等的显示方法 ?细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等的显示方法 in rn ?特异蛋白抗原的定位与定性 ?细胞内特异核酸的定位与定性 ?放射自显影技术  第三节细胞培养、细胞工程与显微操作技术 a a 、光学显微镜技术(light microscopy) ?普通复式光学显微镜技术 ?相差显微镜和微分干涉显微镜(phase-contrast microscope and differential interference contrast microscope, DIC) ?荧光显微镜技术(Fluorescence Microscopy) ?激光共焦扫描显微镜技术(Laser Confocal Microscopy) ? FRET FRAP ?暗视野显微镜(dark field microscope) ?倒置显微镜(inverted microscope) 二、电子显微镜技术 ?电子显微镜的基本知识 ?电镜与光镜的比较 ?电子显微镜的基本构造 ?主要电镜制样技术 ?负染色技术 ?冰冻蚀刻技术 ?超薄切片技术 ?电镜三维重构技术 ?扫描电镜(Scanning electron microscope? SEM) 三、扫描遂道显微镜 ?扫描探针显微镜（Scanning Probe Microscope,SPM ） （80年代发展起来的检测样品微观结构的仪器） 包括：STM、ARR磁力显微镜、摩擦力显微镜等 原理：扫描探针与样品接触或达到很近距离时，即产生彼此间相互作用力，如 量子力学中的隧道效应（隧道电流）、原子间作用力、磁力、摩擦力等， 并在计算机显示出来，从而反映出样品表面形貌信息、电特性或磁特性等。 ?装置：扫描的压电陶瓷，逼近装置，电子学反馈控制系统和数据采集、处理、显示 系统。 ?特点：（1）可对晶体或非晶体成像，无需复杂计算,且分辨本领高。 （侧分辨率为0.1?0.2皿，纵分辨率可达O.OOlmn）； （2） 可实时得到样品表面三维图象，可测量厚度信息； （3） 可在真空、大气、液体等多种条件下工作；非破坏性测量。 （4） 可连续成像，进行动态观察 ?用途：纳米生物学研究领域中的重要工具，在原子水平上揭示样本表面的结构。 普通复式光学显微镜技术 光镜样本制作 分辨力(resolving power):显微镜或人眼能将相 邻两个质点区分开来的能力 分辨率(resolution):指人眼或显微镜在25cm处，能 清楚分辨的两个质点间的最小距离 二 0.61 人 =N-Sina/2 荧光显微镜技术(Fluorescence Microscopy) ?原理与应用 ?直接荧光标记技术 ?间接免疫荧光标记技术 ?在光镜水平用于特异蛋白质 等生物大分子的定性定位： 如绿色荧光蛋白(GFP)的应用. 激光共焦扫描显微镜技术 (Laser Scanning Confocal Microscopy ) ?原理 ?应用: 排除焦平面以外光的干扰，增强 图像反差和提高分辨率(L4—1.7), 可重构样品的三维结构。 ?相差显微镜(phase-contrast microscope) 将光程差或相位差转换成振幅差，可用于观察活细胞 ?微分干涉显微镜(differential-interference microscope,DIC) 偏振光经合成后，使样品中厚度上的微小区别转化成 明暗区别