尖端赛多孢子菌检测方案设计.pdfVIP

目录 1.病例 1 2 尖端赛多孢子菌的概述 1 3.尖端赛多孢子菌的检验过程 1 3.1 标本类型 1 3.2 标本采集 1 3.3 标本处理流程 3 4.检验结果与报告 3 4.1 细菌培养24h/48h培养皿及涂片染色结果3 4.2 免疫学检验结果操作及结果4 4.2.1 仪器准备4 4.2.2 试剂准备4 4.2.3 G试验检测方法及原理4 4.2.3 操作步骤4 4.3试验结果 5 4.4 GM试验检测方法及原理5 4.4.1 仪器准备5 4.4.2 试剂准备5 4.4.3 操作步骤5 4.5结果6 5.总结及体会 6 1.病例 入院情况:蒋某某，男，4岁，因“发现于池塘溺水并意识丧失、 气促6小时30分钟”入院。入院体查：明显皮疹及出血点，全身浅 表淋巴结不大，口唇苍白，有紫色发绀，颈部柔软，气管居中，双侧 甲状腺无赠生肿大。咽喉红肿，胸廓大小、形态正常，双侧对称无畸 形，呼吸急促，呼吸三凹征阳性，双肺呼吸音粗，可闻及大量中粗湿 啰音，无胸膜摩擦音。生化试验结果：肝功能；嗜肺军团菌、人疱疹 病毒1型、人疱疹4型、嗜血杆菌 、尖端赛多孢子菌，曲霉半乳聚 糖 （GM试验）检测：1.40皮克/ml，真菌葡聚糖 （G试验）检测：245 皮克/ml。 2.概述 尖端赛多孢子菌 （S cedosperum apiospermum）即波氏假阿什菌 的无性型是一种侵袭性较强的条件致病真菌。广泛分布于各种自然材 料中，如沼泽、湿地、污水、腐物、咸水等。 波氏假阿什菌属于子囊亚门，不整囊菌纲，散囊菌目，散囊菌科， 赛多孢霉菌属；其无性型即尖端赛多孢子菌，属于半知菌亚门，丝孢 菌纲，丝孢菌目，从梗孢科。 尖端赛多孢子菌大多引起深部感染，可侵犯人体的多种器官导致 各种疾病。 3.尖端赛多孢子菌检验过程 3.1标本类型：痰标本，血清标本 3.2标本采集： 使用专用的痰杯留取清晨漱口后，咳出第一口痰，注意用药前采 集，采集后送检不超过2h。 G试验需使用无菌无热源的BD负压红色采血管，GM试验使用普 通红色采血管采血，各采血4ml。 3.3标本处理流程 痰标本 1.染色镜检，痰涂片固定革兰氏染色。直接镜检革兰氏染色结果 为：白细胞:10-25hp 鳞状上皮细胞10 少许阴性杆菌 少许阳性杆 菌，为合格痰标本，进行痰标本标本培养。 2.痰标本三区划线分离增菌培养，使用微生物实验室常规检验接 种培养基：血平板 （BA），巧克力平板 （CA），沙保罗培养基 （真菌 培养基），麦康凯琼脂平板。 初次分离培养放入含有5%-10%二氧化碳培养箱进行24h分离培 养，48小时后转至普通培养箱续培。 血液标本 3000转离心，分离出血清， 4.检验结果与报告 4.1细菌培养24h/48h培养皿结果剂涂片染色结果 1.血平板结果 （见图1）。 生长特点：菌落特征48h后可见白色絮状菌落，4d后培养皿 菌落中央逐渐变成褐色，菌丝生长向四周扩散。 图1 血平板结果 沙保罗真菌培养基置于单独恒温箱培养(培养五天后)结果（见 图2）。 菌落特点：灰白，边缘不整齐，毛糙与一般真菌菌落特点一致。 巧克力培养基包括麦康凯 （MAC）无致病菌菌落生长。 图2 真菌培养基结果 2.取血平板上丝状菌落进行乳酸酚棉蓝染色 原理：真菌细胞、菌丝和产孢子结构等染成亮蓝或者深蓝色。背 景为暗淡的蓝色。 （1）涂片，编号。在干净的载玻上滴加3-4滴乳酸酚棉蓝染液 （2）用灭菌后接种环取血平板培养皿上少量可疑菌丝进行涂片， 再将菌丝细细分开置于染液中，然后将盖玻片小心盖上（酒精灯加热， 固定染色），再置于低倍镜下观察。 尖端赛多孢子菌乳酸酚棉蓝染色光学显微镜下观察：低倍镜头 下见有隔菌丝，较粗，菌丝为不规则分叉。分生孢子呈椭圆着色深蓝 色 （见图3）