运动调节DNA甲基化提高BDNF-TrkB信号通路的机制研究.pdfVIP

运动调节DNA 甲基化提高BDNF-TrkB信号通路 的机制研究 摘 要 目的：探讨DNA 甲基化在运动调节BDNF-TrkB 信号通路中的作用机制。研究 长期中等强度的运动对青春期小鼠海马区DNA 甲基化水平及BDNF-TrkB 信号通路 影响的作用机制。明确运动促进脑健康及运动提高学习记忆的分子机制，最终为有 效开展科学健身和针对不同人群开展有效的健身指导提供理论和实践依据。 8 SPF 24 C N 12 方法：购入 周龄 级雄性小鼠 只，随机分为安静对照组 （ 组， ） 和运动对照组 （E 组,N 12）。实验小鼠置于标准动物房，常规分笼饲养，自由饮食 进水。对运动组小鼠进行6周的中等强度的跑台运动干预，每天运动40min，每周5 C 12 次。 组小鼠不进行任何形式的运动干预。运动干预结束后，实验小鼠禁食 小时， 脱颈处死。快速分离海马，液氮冷冻并存于-80℃冰箱，采用蛋白质免疫技术检测 BDNF-TrkB 信号通路关键分子BDNF 和TrkB 蛋白表达情况，采用甲基化中硫酸盐 BDNF TrkB 测序法检测 、 启动子甲基化情况。 结果：6 周中等强度的跑台运动显著提高运动组小鼠海马BDNF、TrkB 蛋白表 达，差异均具有显著性。运动组小鼠海马BDNF、TrkB 启动子区甲基化水平显著降 低，差异均具有显著性。 结论：6周中等强度的跑台运动通过降低BDNF 和TrkB 蛋白启动子区甲基化水 平，提高运动组小鼠海马BDNF 和TrkB 蛋白表达水平。 关键词：跑台运动；海马；DNA 甲基化；BDNF-TrkB 信号通路； I 目 录 1 引言1 2 文献综述3 2.1 运动对海马的影响3 2.2 神经营养因子的生物学特征4 2.2.1 运动对BDNF 蛋白表达的影响5 2.2.2 运动增加BDNF 表达对学习记忆能力的影响5 2.3DNA 甲基化7 2.3.1 运动对DNA 甲基化的影响8 2.3.2 运动调节DNA 甲基化对学习记忆的影响9 2.3.3 运动DNA 甲基化增强BDNF 的表达水平10 3 材料与方法12 3.1 实验动物分组12 3.2 运动方案12 3.3 取材12 3.4 指标检测12 3.4.1DNA 甲基化水平的检测12 3.4.2DNA 提取13 3.4.3DNA 甲基化处理13 3.4.4 甲基化后DNA 纯化15 3.4.5 目标区域捕获15 目标探针设计15 3.5WESTERN BLOTTING 检测蛋白表达情况17 3.6 数据统计17 4 结果19 4.1 运动对小鼠海马BDNF 启动子区DNA 甲基化水平的影响 19 4.2 运动对小鼠海马TRKB 启动子区DNA 甲基化水平的影响21 4.3 运动对小鼠海马BDNF-TRKB 蛋白表达水平的影响23 5 讨论24 5.1 跑台运动对小鼠海马内BDNF-TRKB 的影响24 5.2 跑台运动对大鼠海马BDNF 和TRKBDNA 甲基化水平的影响25 6 结论27 参考文献28 III 1 引言 学习能力与记忆功能是存在与人类大脑中的一种生理功能，学习能力是在接触 新环境、新事物，并从中获取新知识的过程，而记忆功能是随着时间的推移，在大