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甜睡口服液对小鼠睡眠改善作用的研究 失眠症是睡眠障碍的突出表现，主要表现为睡眠困难或早期睡眠，通常伴有睡眠不足和多梦。由于失眠与抑郁或焦虑等疾病相关性强,可严重影响人们的正常生活、工作和学习,并能加重或诱发其他心脑血管方面的疾病,增加社会和家庭的负担,因此开发具有防治失眠症或能改善睡眠质量的新药具有重要意义。针对失眠的药物治疗在改善睡眠的同时容易影响正常生理睡眠,以及清醒后存在药物延续作用。 此外,药物治疗失眠症常引起药物依赖、耐受等不良反应,因此该类药物多按照“按需用药”和“间断性用药”的原则使用。而中医药治疗失眠,因其不良反应小以及依赖性轻,具有一定优势。 甜睡口服液是以酸枣仁 1 化学试剂及标准试剂 甜睡口服液由日加满饮品( 上海) 有限公司提供,生产批号:2013032011,其人体推荐剂量为1瓶/d,50 ml/ 瓶。其主要成分为:酸枣仁提取物、 刺五加提取物、北五味子提取物和 γ- 氨基丁酸。戊巴比妥钠由中国医药( 集团) 上海化学试剂公司提供,生产批号:规格25 g/ 瓶。巴比妥钠由华迈科公司提供,生产批号:B031306,规格5g/ 瓶。 雄性ICR小鼠(90只),20 ~ 22 g, 由上海西普尔- 必凯实验动物有限公司提供,许可证号: SCXK( 沪)2008-0016。 1.2 单次给药和大鼠睡眠时间 小鼠按随机数字表分成9组,进行延长戊巴比妥钠睡眠时间试验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验和巴比妥钠睡眠潜伏期试验,其中每项试验包括3个小组,参照卫生部《保健食品检验与评价技术规范》,分别给予溶剂、低剂量及高剂量甜睡口服液干预(n=10)。其中甜睡口服液低剂量为0.684 g/kg ( 相当于人体剂量的10倍), 高剂量为2.052 g/kg ( 相当于人体剂量的30倍)。具体配制方法为:称取甜睡口服液全配方原料干粉1.71 g( 低剂量) 和5.13 g( 高剂量),分别加入双蒸水至50 ml,完全溶解后备用。溶剂对照组给予相同体积的双蒸水。 各组小鼠每日给予溶剂或甜睡口服液(0.2 ml/10 g), 连续给予10 d,末次给予溶剂或甜睡口服液后15 min,延长戊巴比妥钠睡眠时间试验组小鼠均腹腔注射戊巴比妥钠(50 mg/kg,10 ml/kg),以小鼠翻正反射消失达1 min以上作为入睡判断标准,翻正反射消失至恢复这段时间为睡眠时间,观察各组小鼠睡眠时间,并记录从给予戊巴比妥钠至出现翻正反射消失的时间即入睡潜伏期,睡眠时间延长率(%) 及睡眠潜伏期缩短率(%)。戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验组小鼠在末次给药后15 min,腹腔注射戊巴比妥钠(30 mg/kg,10 ml/kg),以小鼠翻正反射消失达1 min以上作为入睡判断标准,观察给予戊巴比妥钠30 min内各组小鼠入睡只数。巴比妥钠睡眠潜伏期试验组小鼠在末次给药后15 min腹腔注射巴比妥钠(250 mg/kg,10 ml/kg),以小鼠翻正反射消失达1 min以上作为入睡判断标准,观察各组动物睡眠潜伏期及睡眠潜伏期缩短率(%)。 睡眠时间延长率= 甜睡口服液干预组睡眠时间- 对照组睡眠时间/ 对照组睡眠时间 ×100% 睡眠潜伏期缩短率= 对照组睡眠潜伏期—甜睡口服液干预组睡眠潜伏期/ 对照组睡眠潜伏期 × 100% 1.3 统计分析 数据采用单因素方差分析进行比较,组间差异应用Fisher LSD检验进行分析;计数资料应用 χ 2 结果 2.1 延长戊二醇钠睡眠时间测试 与对照组比较,低、高剂量甜睡口服液组小鼠睡眠时间显著延长(P0.01),小鼠入睡潜伏期缩短(P0.05),见表1。 2.2 苯巴比妥钠阈值下的剂量和催眠试验 与对照组比较,低、高剂量甜睡口服液组小鼠活动度减少,但各组小鼠在给予戊巴比妥钠阈下剂量后入睡只数与溶剂对照组无显著差异,见表2。 2.3 巴比妥钠睡眠潜伏期测试 与对照组比较,低、高剂量甜睡口服液组小鼠睡眠潜伏期显著缩短(P0.05或P0.01),见表3。 2.4 副作用 观察试验期间小鼠的饮食及各种行为,均未发现有明显异常。 3 甜卧口服液及其与巴比妥钠的相互作用 本研究主要依据卫生部《保健食品检验与评价技术规范》(2003版),通过三个方面对甜睡口服液改善睡眠作用进行考察。首先,通过在戊巴比妥钠催眠的基础上,观察甜睡口服液是否能延长睡眠时间,即考察甜睡口服液与戊巴比妥钠催眠作用是否具有协同作用。结果显示,甜睡口服液无论在低剂量还是高剂量条件下均可显著延长小鼠睡眠时间, 缩短入睡潜伏期;其次,在给予巴比妥钠的基础上, 观察甜睡口服液是否能缩短入睡潜伏期,考察其与巴比妥钠的协同作用,结果表明,与溶剂对照组比较,甜睡口服液的两个剂量均可以显著缩短巴比妥钠睡眠潜伏期。戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验可以观察甜睡口服液