水凝胶携带肾素抑制剂阿利吉仑抑制心肌梗死后大鼠心室重构的实验研究.docxVIP

水凝胶携带肾素抑制剂阿利吉仑抑制心肌梗死后大鼠心室重构的实验研究 0 raas活性 急性心脏病（ami）后，肾素-血管紧张素-黄酮（raas）激活。raas激活后，诱导炎症反应、细胞增生和钙化，以调节活性物质的遗传出现，激活各种细胞的外部消息通道，均与心肌梗死后心肠组织的恢复和重建有关。 葡聚糖 - 聚己内酯 - 甲基丙烯酸羟乙酯共聚N - 异丙基丙 烯酰胺 [Dextran-poly ( e-caprolac-tone) -hydroxylethyl methacrylate / poly ( N -isopropylacrylamide) ,Dex -PCL -HEM A / PNIPAAm]水凝胶是一种人工合成的可降解的温度敏感性生物材料。这种新型的高分子材料具有良好的生物相容性,前期试验证明了这种温度敏感性水凝胶注入体内后不具有生物毒性 1 大鼠心肌梗死超早期感染的检测 1. 1实验动物70只4周龄雄性大鼠,平均体重160 ~ 180 g ,购自武汉大学实验动物中心,分笼饲养。 1. 2实验药物阿利吉仑购自大连美仑公司,水凝胶由武汉大学高分子实验室提供; 基质金属蛋白酶-2 ( Matrix metalloproteinases-2,MMP-2 ) 、M M P-9、基质金属蛋白酶抑制剂TIM P-1 ( Tissueinhibitor metalloproteinase,TIM Ps) 抗体购自santa公司; 转化生长因子( Transforming growth factorβ,TGF-β) 抗体购自abcam公司; GAPDH抗体购自杭州贤至生物有限公司。 1. 3心梗模型的建立将70只大鼠随机分成5组: 假手术组( Sham组) 、模型对照组( 磷酸缓冲液组即Pbs组) 、水凝胶组( Gel组) 、Pbs携带阿利吉仑组( Pbs + a组) 、温度敏感型水凝胶携带阿利吉仑组( Gel + a组) ,各组经腹腔注射2% 的戊巴比妥钠( 20 mg /kg) 麻醉后,气管插管,正中开胸,暴露心脏后,在左前降支( LAD) 近端穿线并结扎,Ⅱ导联出现ST段和( 或) T波抬高或降低、结扎线以下心肌颜色变暗为结扎成功。其中假手术组只将缝线穿过冠状动脉不结扎,其余各组在结扎成功后,分别在梗死周边区的4个点注入以下药物,Pbs组: 注射75μL Pbs溶液; Gel组: 注射浓度 为1. 5% 的75μL水凝胶; Pbs + a组: 注射75μL含有1. 5 mg阿利吉仑的Pbs溶液; Gel + a组: 注射含有1. 5 mg 阿利吉仑的浓度为 1. 5% 75 μL 水凝胶。术后注射 3 d 青霉素( 50 万 IU /d) 预防感染。 1. 4检测指标 1. 4. 1注射过量戊巴比妥钠( 200 mg / kg ) 处死实验鼠,随后取出心脏,并用肝素化生理盐水灌洗心脏并分离左心室,每个心脏的一部分用4% 多聚甲醛固定48 h,用石蜡包埋,在梗死部位垂直于长轴横向进行心脏切片,厚度4μm,每个样本在不同层面取3张切片作 为代表。行HE染色、改良M asson三色染色,显微镜下观察梗死部位左心室的形态及水凝胶残余情况。采用Image Pro Plus6. 0多媒体彩色病理图像分析软件测量梗死区面积,并计算梗死百分比。梗死百分比 = 梗死面积/左室总面积×100% 。 应用Image Pro Plus 6. 0多媒体彩色病理图像分析软件系统拍照,通过灰度调节区分胶原和非胶原成分,Masson染色组织中蓝色为阳性胶原。并进行分析测定,计算心肌胶原含量百分比,即胶原容积分数( Collagen volume fraction,CVF: 心肌胶原面积/所测同视野组织总面积,每张切片随机选取10个不重复的视野,取平均值) 。 大鼠处死后取心肌梗死周边区的组织,提取组织蛋白后,采用SDS电泳分析MMP-2、M M P-9、TIM P-1、TGF-β蛋白的表达。 2 各组大鼠心肌组织病理学指标比较 70只大鼠用于本实验,手术过程中死亡7只,造模成功后存活56只,其中假手术组8只,Pbs组、Gel组、Pbs + a组各存活11、12、12只,Gel + a组13只。手术前后各组间相比,大鼠体重未见明显差异( 表1) 。 2. 1心肌梗死面积分析用Image Pro Plus 6. 0多媒体彩色病理图像分析软件分析心肌梗死后发现,与假手术组比较,Pbs组、Gel组、Pbs + a组、Gel + a组的心梗面积明显增加,差异有统计学意义( P 0. 05) ; 与Pbs组比较,Gel组、Gel + a组的梗死面积 明显减小,差异有统 计学意义( P 0. 01) ,提示注射Gel及Gel携带阿利吉仑的治疗,有利于改善心肌重构,而Pb