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响应面法优化克氏原螯虾虾壳中钙提取工艺 0 虾壳等下脚料会对人体代谢的组成和组成 目前，中国的克氏原虾主要用于出口，出口产品主要以杏仁为形式。因此，在虾加工过程中，大量的下脚材料（占虾总数的30%40%）。 钙是人体内必需的元素之一, 它是组成人体骨骼、牙齿、脏器和肌肉组织的重要成分 1 材料和方法 1.1 生成判断纯 虾壳:江西海浩鄱阳湖水产有限公司. 乳酸、氨水、氯化铵、三乙醇胺、乙二胺基四乙酸二钠 (EDTA) 、铬黑T、氯化钙、盐酸、氯化铵、氨水、氢氧化钠等均为分析纯. 1.2 仪器、试剂和仪器 数显智能控温磁力搅拌器:巩义市予华仪器有限责任公司;电子分析天平:赛多利斯科学仪器 (北京) 有限公司;粉碎机:上海比朗仪器有限公司;电热恒温鼓风干燥箱:上海一恒科学仪器有限公司. 1.3 虾壳的干燥、粉碎 虾壳预处理:用4%的氢氧化钠溶液浸泡虾壳4 h, 用水洗至中性, 重复1次.将经过初分的虾壳置于100℃的鼓风干燥机中干燥12 h.再将干燥好的虾壳粉碎, 过40目筛, 贮存备用. 1.4 钙含量的测定 钙标准溶液的配制:准确称取已恒质量的无水氯化钙2.774 6 g, 用蒸馏水定容至250 m L配成0.1 mol/L的氯化钙溶液, 此时钙离子的浓度为4 mg/m L. 钙标准曲线的测定:分别取1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、10.0 m L的氯化钙溶液于50 m L的三角瓶中, 均用蒸馏水定容至总体积为10 m L.分别在待测溶液中加入3 m L的三乙醇胺溶液, 5 m L p H 10的氨性溶液和两滴铬黑T指示剂, 然后以0.021 5mol/L的EDTA标准溶液滴定到溶液由紫蓝色变成蓝色.以EDTA滴定体积和钙浓度作图, 得到钙标准曲线.通过实验计算钙的标准曲线为y=2.9786x+0.590 5 (y代表EDTA的滴定体积, x代表钙离子浓度, R 虾壳浸酸溶液中钙含量的测定:取1 m L浸酸溶液加9 m L蒸馏水, 分别加入3 m L三乙醇胺和5 m L氨性溶液, 两滴铬黑T指示剂, 以标准EDTA溶液滴定到溶液由紫蓝色转为蓝色.根据标准回归方程计算浸酸溶液中钙含量. 1.5 样品中钙含量的测定 根据参考文献[11]中的测定方法略作修改. (1) 乳酸添加量的确定:虾壳粉用量为10 g, 加水量为100 m L, 提取时间为2 h, 提取温度为35℃, 乳酸添加量分别为13.5 m L、16.0 m L、18.5 m L、21.0 m L、23.5 m L.待反应结束后, 分别测定浸提液中钙的含量. (2) 提取温度的确定:虾壳粉用量为10 g, 加水量为100 m L, 提取时间为2 h, 乳酸添加量为 (1) 试验中较适宜的结果, 提取温度分别为25℃、35℃、45℃、55℃、65℃.待反应结束后, 分别测定浸提液中钙的含量. (3) 提取时间的确定:虾壳粉用量为10 g, 加水量为l00 m L, 乳酸添加量和提取温度分别采用 (1) 和 (2) 试验中较适宜的结果, 提取时间分别为10 min、20 min、30 min、40 min、50 min.待反应结束后, 分别测定浸提液中钙的含量. 1.6 最佳工艺的预测和验证 根据单因素试验的结果, 采用乳酸添加量、提取时间、提取温度3个因素与钙提取量进行响应面试验设计优化虾壳钙提取工艺.通过DesignExpert 8.0.6软件对试验结果数据进行回归分析, 预测最优的工艺参数.在分析得到的最佳工艺提取条件下, 做3组平行试验验证响应面分析法的可靠性. 2 结果与分析 2.1 单因素试验 2.1.1 乳酸添加量 由图1可以看出, 在乳酸添加量达到21 m L之前, 钙的提取量随着乳酸的体积增加而增加并达到最大值, 之后又随着乳酸添加量的增加而减少.产生这种现象的原因可能是乳酸添加量为21m L时, 转化制取的乳酸钙的产率和含量已经达到了一种平衡的饱和状态, 处在具有较好产率的范围内.但是当乳酸添加量继续增加时, 乳酸钙的产率减少, 主要是因为当乳酸过量时会在反应时形成乳酸酐, 并吸附在乳酸钙表面上, 使其钙的含量降低.因此, 21 m L乳酸添加量最佳. 2.1.2 反应的温度对乳酸钙提取量的影响 由图2可知, 在25~55℃范围内, 虾壳钙提取量随着温度的升高而增加, 继续升高温度钙提取量下降.这主要是由于温度的升高可以增加大分子间的碰撞几率, 使得反应向乳酸钙生成的方向进行, 但是随着温度的不断升高, 乳酸发生酯化反应生成乳醛乳酸, 并与钙离子结合生成对应的钙盐, 导致生成的乳酸钙含量逐渐下降 2.1.3 反应时间和时间. 由图3可以看出, 在提取30 min之内, 钙提取量随着反应时间的延长而增加, 主要是由于在反应刚开始时,