维生素c对克氏原螯虾生长及非特异性免疫机能的影响.docxVIP

维生素c对克氏原螯虾生长及非特异性免疫机能的影响 自13日以来，小型龙虾（学名克氏原虾，微藻海）产业的迅速发展。2019年，中国小型龙虾养殖规模超过129.66万公顷。 1 学习方法 1.1 小虾及其他水泥池养殖 采用单因子试验设计，选择规格基本一致、活力好、附肢健全、初始体质量为（3.19±0.06)g的克氏原螯虾幼虾540尾，随机分为6组，每组3个重复，放入18个循环流水水泥池中养殖（2 m×2 m×0.8 m），每个水泥池放养30尾，同时配套遮阳与隐蔽设施。 1.2 饲料及维生素c 以鱼粉、豆粕为蛋白源，豆油为脂肪源，并补充矿物质、维生素等，在此基础上添加不同水平的维生素C，配制6组等氮等能饲料，见表1。饲料中维生素C(95%包膜维生素C，罗氏公司）的添加量为：0、30、60、120、240和480 mg/kg。试验饲料委托安徽新希望饲料有限公司加工制作，每组饲料2 t/批次，选取中间部分的饲料，50℃烘干后置于-20℃冰柜中保存备用。 1.3 虾的摄食及死亡情况观察 克氏原螯虾幼虾在水泥池暂养14 d后正式开始投喂试验饲料，每天投喂2次（07:30—08:30和18:30—19:30）。初始日投饵量为虾体质量的3%，后期根据摄食和生长情况适当调整，以投饵后1 h内吃完为宜。饲养期间水温21.9～27.5℃，p H值7.8～8.5，ρ（溶解氧）6 mg/L，ρ（氨氮）0.04 mg/L，ρ（硫化氢）0.01 mg/L，ρ（亚硝酸盐）0.01 mg/L，试验期间07:30—18:30打开遮阳网，每日观察虾摄食及死亡情况，发现死虾及时捞出并称重计数，分析死亡原因。试验期60 d。 1.4 虾体的解剖和测定 养殖试验结束后，禁食24 h，对各水泥池的克氏原螯虾分别进行计数和称重，以计算存活率和增重率。冰浴麻醉后进行虾体的解剖，每个水泥池随机选取3尾虾（每组9尾虾），先抽血淋巴，然后采集肌肉、肝胰腺并称重。另随机采集3尾虾的肝胰腺，液氮速冻后于-80℃冰箱保存备用，待测定免疫相关指标。 1.5 血液免疫指标 (1）生长指标。分别按下式计算增重率（WGR）、成活率（SR）、肥满度（CF）、含肉率（MF）、肝胰腺指数（HSI）、饲料系数（FCR）、特定生长率（SGR）等指标。 M M N L T (2）血液免疫指标。用1 m L无菌注射器（含抗凝剂）从螯虾头胸甲腹侧取血淋巴，注入无菌1.5 m L离心管中，使血液与抗凝剂最终比例为1∶1，低温离心（4℃，3 000 r/min)10 min（分离血浆和血细胞），取上清液，-20℃保存备用，用于血液免疫指标（溶菌酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶）的测定。 (3）肝胰腺抗氧化相关指标。将采集的肝胰腺用生理盐水冲洗干净，然后按1∶9质量体积比加入生理盐水，冰浴匀浆，以3 500 r/min离心10 min，取上清液置于新的离心管待测。所有上清液先用考马斯亮蓝法检测其蛋白浓度后再测其他抗氧化指标。肝胰腺超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。 1.6 多重比较分析 采用Excel 2010和SPSS 20.0对试验数据进行统计学分析（One Way ANOVA），多重比较采用Duncan法，试验数据以平均值±标准差（Mean±Std）表示，统计学意义水平设定为P0.05，表中同行数据肩标字母不同，表示组间差异具统计学意义（P0.05）。 2 结果与分析 2.1 增重率和特定生长率 维生素C添加水平对克氏原螯虾生长的影响见表2。由表2可见，120 mg/kg Vc试验组虾的增重率和特定生长率显著高于其他各组（P0.05);480 mg/kg Vc组虾的含肉率显著高于其他各组（P0.05）；各组间克氏原螯虾其余生长指标未出现统计学意义差异（P0.05）。 2.2 血清溶菌酶水平 维生素C添加水平对克氏原螯虾血液免疫指标的影响见表3。由表3可见，120 mg/kg Vc试验组血清溶菌酶显著高于其他各组（P0.05），而其他试验组间则没有统计学意义差异（P0.05);120和480 mg/kg Vc试验组血清酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性没有统计学意义差异（P0.05），却显著高于其他4组（P0.05）。 2.3 维生素c添加量对克氏原螯虾肝胰腺超氧化物歧化酶活性的影响 维生素C添加水平对克氏原螯虾肝胰腺抗氧化能力的影响见表4。由表4可见，120 mg/kg Vc组虾的肝胰腺过氧化氢酶活性显著高于其他各组（P0.05），其他试验组间则没有统计学意义差异（P0.05）；饲料中维生素C添加量对克氏原螯虾肝胰腺超氧化物歧化酶活性没有显著影响（P0.05）；饲料中未添加维生素C组肝胰腺MDA含量显著高于各添加组（P0.05);120 mg/kg Vc试