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克氏征嵌合体患者的染色体诊断 小信号综合征，即先天性睾丸发育不全，是男性最常见的性染色体异常类型，通常表现为小硬睾丸和无精神症。典型克氏征的染色体核型为47,XXY,非典型克氏征为嵌合体,即46,XY/47,XXY及其衍生型。嵌合型的症状变异较大,可出现典型的克氏征症状,也可表现为睾丸大小正常和精液常规正常等。 有研究报道 1 数据和方法 1.1 染色体核型异常病例对照 病例1:男,41岁,结婚17年,性生活正常。婚后2年顺产一胎儿,胎儿出生后1周内不明原因死亡,后继发不育。患者发育正常。诊断为弱畸精症合并染色体核型异常。病例2:男,40岁。诊断为少弱畸精症、染色体核型异常。病例3:男,38岁。婚后不避孕不育12年,诊断为少弱精症,染色体核型异常。另选取1例31岁,已生育过健康子女的正常男性为对照。精液检查结果见表1。 抽取患者及对照者外周血分离淋巴细胞进行FISH分析。患者手淫法取精,室温液化后将精液分成三份,一份不处理(A组),一份经上游优化法处理(B组),另一份经percoll密度梯度离心法优化处理(C组)。 1.2 学习方法 1.2.1 x、cepy法 选用美国Vysis公司生产的XY染色体着丝粒混合探针CEP X(p11.1~q11.1橙色标记)、CEP Y(p11.1~q11.1绿色标记),和CEP18(p11.1~q11.1)进行三色FISH杂交,分别以正常男性外周血淋巴细胞及精子做对照。 1.2.2 表层细胞处理 分别抽取患者和对照者外周血2 m L,离心后留取沉淀表层细胞,低渗处理20 min。加入1.75 m L固定液(甲醇/冰醋酸3∶1),预固定5 min后离心,再固定后滴片,风干,划出边长0.5 cm的方形杂交区。 1.2.3 混合前处理 A组精液用洗精液洗涤精子2次;B组精液经上游法优化处理;C组精液用percoll密度梯度离心法优化处理 1.2.4 原一侧交叉fish 按试剂盒说明书进行操作。 1.3 统计分析 数据采用SPSS 13.0统计软件包进行分析。率的比较用χ 2 结果 2.1 c.9.5%是新闻生产参数,其符合比例的标准 病例1、病例2、病例3及对照组的杂交率分别为97.9%(477/487)、98.6%(495/502)、97.6%(1 026/1 051)和98%(98/100),结果见表2。分别与淋巴细胞G显带核型分析结果相比,三例FISH结果所发现的嵌合体比例均无显著性差异(P=0.868,0.755,0.624),同时发现病例1存在小比例的47,XYY细胞系。 2.2 病例4一般病例,性别统计,第5 病例1、病例2、病例3及对照的精子FISH杂交率分别为97.4%(1211/1243)、98.0%(909/928)、97.3%(900/925)及97.6%(952/975)。 如表3所示,三例患者精液的X:Y精子比例与对照相比差异均无显著性(P=0.832,0.114,0.232)。与对照相比,三例患者的总精子异常率及XY精子比例均增高,病例1的差异无显著性(P=0.088,0.098),病例2、病例3差异有显著性(病例2 P=0.002,0.003;病例3 P=0.001,0.004)。三例患者的XX精子比例分别为0.2%、0.3%、0.3%,与对照组相比无显著性差异(P=0.325,0.285,0.287)。 2.3 物权:843、97.9% 三组FISH杂交率分别为97.5%(3020/3096)、97.2%(2787/2868)、97.9%(2688/2746)。如表4所示,三组间的X:Y精子比例、总精子异常率均无显著性差异(P=0.649,0.887),异常精子的构成中,三组间的XX、YY、XY精子比例差异均无显著性(P=0.654,0.732,0.624)。 3 讨论 3.1 克氏症嵌合体的诊断 克氏综合征是男性最常见的性染色体异常类型,发生率约为1∶600 对于嵌合体在克氏征中所占比例,各研究者的结果差异较大 3.2 患者精子fish的研究结果 非嵌合型克氏征患者通常表现为无精症,但有研究报道 关于嵌合型克氏征患者精子FISH的研究结果较少。在本研究中对三例嵌合型克氏征患者的精子进行FISH分析,结果显示:97%以上的精子为正常精子,且X∶Y比例与对照组相比无显著性差异,与J.BLANCO等报道的结果相符 3.3 两种方法对精子异常率的评估 目前,辅助生殖技术中最常用的两种精子优选处理方法为purcoll密度梯度离心法及上游法,对于有接受辅助生殖治疗适应征的患者,统计处理后精子的异常率对评估子代风险更有意义 该研究表明,两种优选方法均能提高精子活动力,但精子的X:Y比例、精子总异常率及异常精子XY、XX所占比率与处理前相比,差异均无显著性。 综上所述,与淋巴细胞