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碱性果胶酶诱导黄瓜抗病作用研究 利用诱导剂激活植物的神经系统是近年来植物疾病防治领域的一项重要新技术、新技术和研究热点。 果胶酶是指能够催化果胶质分解的多种酶的总称, 按其作用最适p H分为酸性果胶酶和碱性果胶酶 1 材料和方法 1.1 试验用黄瓜病原菌 1) 黄瓜黄花苗。选用感黑星病的中农11黄瓜品种 (中国农科院培育) 培育黄花苗。培育方法是在20 cm×30 cm的搪瓷盘中铺1块双层脱脂棉纱布, 润湿, 在上面均匀摆放12粒×9粒黄瓜种子, 加盖, 置人工气候箱中, 20~25℃条件下避光培养4 d左右, 当长出下胚轴并且子叶脱壳后, 供试验用。 2) 病原菌。试验所用黄瓜黑星病菌 (Cladosporium cucumerinum) 来自本实验室。 3) 碱性果胶酶粗酶S-2、S-4。在由甜菜渣5.0g、酵母膏0.15 g、Na 1.2 测试方法 1.2.1 性水果凝胶酶活性测定 向具塞试管中加入1.8 ml 0.30%聚半乳糖醛酸溶液 (用0.05 mol/L的Na 1.2.2 黄化苗根、根的处理 将S-2或S-4按照一定的酶活力, 添加万分之五的表面活性剂 (吐温80, 下称) , 均匀地喷洒在黄瓜黄化苗表面 (全株喷雾) , 然后向搪瓷盘中加入少量清水, 冲洗黄化苗根部3次, 洗去根部残留的样品。每隔2 d处理1次, 连续处理3次。以清水喷雾作对照, 或以添加吐温80的缓冲液或经煮沸灭活的同样浓度的粗酶样品作对照。1.2.3植物病原菌黄瓜黑星病的接种。将黄瓜黑星病病原菌在PDA培养基平板上培养5 d, 配成孢子悬浮液 (含万分之五吐温80) , 浓度为4×10 1.2.4 植株病情调查 接种病原菌的植株, 于20~25℃人工气候箱中培养一段时间后, 当对照植株明显发病后, 调查各处理的病情指数, 计算出经诱导的植株对病害的诱导防病效果 每个处理约30株, 重复3次, 结果取平均值。结果的相对标准偏差小于10%。 2 结果与讨论 2.1 未添加吐温80的患者 分别对S-2 (200 u/ml) 、缓冲液、蒸馏水添加万分之五的吐温80用于诱导黄瓜黄化苗抗病, 以未添加吐温80的为对照。试验结果 (表1) 显示, 添加吐温80有利S-2诱导黄瓜黄化苗抗病, 对黄瓜叶和茎上黑星病的诱导防病效果分别为64.8%和64.0%;未添加吐温80的诱导防病效果不明显。其原因可能是作为表面活性剂的吐温80能使S-2均匀分散于植株表面而发挥诱导抗病作用。 2.2 s-2的诱导抗病效果 以不同酶活的S-2处理黄瓜黄化苗, 研究其对黄瓜诱导抗病效果的影响。试验结果 (表2) 显示, S-2 (200 u/ml) 的诱导抗病效果最好, 其对黄瓜叶和茎上黑星病的诱导防病效果分别高达73.7%和80.0%;其次为S-2 (100 u/ml) ;酶活太低的S-2, 诱导抗病效果不明显。 2.3 ph对s-2诱导黄瓜抗病效果的影响 以不同p H的S-2 (200 u/ml) 处理黄瓜黄化苗, 考查其对黄瓜抗病效果的影响。试验结果 (表3) 显示, 不同p H的S-2 (200 u/ml) 对黄瓜的诱导抗病效果存在差异。其中, p H 8.0时抗病效果较好, 对黄瓜叶和茎上黑星病的诱导防病效果分别达到64.8%和78.5%;其次为p H 8.9时;p H太高会出现药害。可见, S-2必须在适当的酸碱度条件下才能发挥理想的诱导防病效果。 2.4 s-4的诱导抗病效果 用不同酶活的S-4进行喷雾处理黄瓜黄化苗, 考查其对黄瓜诱导抗病效果的影响。试验结果 (表4) 显示, 酶活不同, S-4对黄瓜诱导防病效果不同。其中S-4 (20u/ml) 的诱导防病效果最好, 其对黄瓜叶和茎上黑星病的诱导防病效果分别高达80.6%和86.6%;其次为S-4 (10 u/ml) ;酶活40~160 u/ml的S-4对叶上黑星病的诱导防病效果略低于S-4 (10 u/ml) , 但对茎上黑星病的诱导防病效果较好;酶活太低的S-4效果最差。 2.5 ph对s-4诱导黄瓜抗病效果的影响 将黄瓜黄化苗用不同p H的S-4 (20 uml) 进行喷雾处理, 研究其对黄瓜诱导抗病效果的影响。试验结果 (表5) 显示, p H不同的S-4 (20 u/ml) 对黄瓜的诱导抗病效果不同。其中S-4 (20 u/ml) 在p H 8.0时诱导防病效果较好, 其对黄瓜叶和茎上黑星病的诱导防病效果分别达到75.0%和87.8%;其次为p H 8.8的S-4 (20u/ml) ;p H太高不仅诱导防病效果差, 而且会使黄瓜植株发生药害。 3 两种酶的用量对苗诱导抗病效果的影响 碱性果胶酶S-2和S-4对黄瓜黄化苗有明显的诱导抗病效果。吐温80能有效促进其诱导抗病性的发挥;两种碱性果胶酶对黄瓜