球孢白僵菌未干燥孢子粉和冻干孢子粉贮藏性能的比较.docxVIP

球孢白僵菌未干燥孢子粉和冻干孢子粉贮藏性能的比较 1 白陷菌的药物代谢 养分、蛋白质和养分不仅存在于细菌的营养丝中，而且作为一种重要的能量储备也存在于菌株中。这些养分分布在与膜结合的液体泡沫中，或以游离的形式存在在细胞中，或与细胞一起结合在一起。例如，在外部营养不足的情况下，c-和n型源可以缓慢代谢并开始发育。此前，在各种真菌的胚胎中检测到这些化合物及其代谢活动，但对白僵尸菌及其代谢的研究很少。例如，糖和蛋白质等。 球孢白僵菌(Beauveria bassiana (Balsamo)Vuillemin)是一种重要的杀虫真菌,在国外已被开发成为多种商品化杀虫制剂,用于防治多种农林害虫.孢子粉是研制白僵菌各种剂型的基础,其含水量作为影响孢子活性的重要参数倍受重视,因为孢子粉含水量过高会导致孢子提前萌发和自溶.然而,白僵菌孢子在贮存过程中的活力与内贮营养物的代谢变化及其条件仍知之甚少,以致延长孢子粉贮存期的若干努力收效甚微.在本研究中,作者通过在不同含水量和温度组合条件下贮存球孢白僵菌孢子粉期间定期检测孢子内贮多糖和蛋白质的代谢水平及活孢率,探讨了该菌孢子在贮存过程中营养生理的变化规律以及含水量、贮存温度对孢子活力的影响. 2 材料和方法 2.1 孢子粉的制备 球孢白僵菌BBSG8702菌株自病死蚜尸分离而得,在4℃冰箱中保存于萨氏培养基平板上.孢子粉的生产采用两相发酵法.种子培养基为萨氏培养液(葡萄糖4%加蛋白胨1%),产孢培养基配方为2%玉米粉、1%麸皮、0.5%蛋白胨、0.3%KH2PO4、0.1%MgSO4·7H2O、0.1%NH4NO3及2%琼脂. 在实验室生产两批孢子粉.第一批孢子粉一分为二,一份不干燥,也不进行任何加工处理(简称未干燥粉);另一份直接放进12LS型冷冻干燥机(VirTis Company,New York,USA)中进行真空冷冻干燥,制成冻干粉.真空冷冻干燥的程序是:先将孢子粉放入已预冷至-48℃的真空冷冻干燥仓中,经1h升温至-46℃,维持9h后经2h升温至-28℃,维持6h后经2h升温至-8℃,维持4h后经20min升温至5℃,维持4h后经2h升温至25℃,在此温度维持6h后干燥结束,总计36h.未干燥粉和冻干粉的含水量测定参照殷凤明等。第二批孢子粉全部按相同程序进行真空冷冻干燥,使含水量降至5%以下. 2.2 冻干粉贮藏期测定指标 将第一批生产的未干燥粉和冻干粉分别贮存于4℃和20℃恒温下,贮存开始前取样测定孢子粉的总糖和蛋白质含量及萌发率,贮存后每隔5 d取样测定相同指标,持续1个月.第二批生产的冻干粉同样分别贮存于4℃和20℃恒温下,持续1年每隔15d取样测定活孢率,以考查低含水量孢子粉的贮存寿命. 2.3 生理指标的测量 2.3.1 添加1.2.2dnah 精确称取未干燥粉20mg和冻干粉10mg,分别加入10ml 3mol·L-1HCl,沸水浴水解15 min.继之,水解液中加入5ml 6mol·L-1NaOH,摇匀并过滤。过滤液用0.2mol·L-1磷酸缓冲液(pH 7.0)定容至50ml.糖含量测定参照蔡成武和袁厚积的方法.每样品重复3次,以蒸馏水为空白对照,葡萄糖为标准.按孢子粉含水量,将总糖含量换算成单位重量干孢子粉的含量(μg·mg-1). 2.3.2 蛋白质含量测定 精确称取未干燥粉20mg和冻干粉1Omg,分别加入2m1 0.5mol·L-1NaOH,沸水浴水解15min.然后,在水解液中加入1ml 1mol·L-1HCl,摇匀过滤,滤液用0.2mol·L-1磷酸缓冲液(pH 7.0)定容至5ml.蛋白质含量测定按Braford的方法进行.每样品重复3次,以蒸馏水为空白对照,以牛血清白蛋白为标准.按孢子粉含水量,将蛋白含量换算成单位重量干孢子粉的含量(μg·mg-1). 2.3.3 权利不足营养液和水剂制备出芽孢杆菌1. 取样品孢子粉少许,加入5ml无菌水中,配制成107个·ml-1孢子的悬液.各取1ml孢子悬液分别加入9ml营养液(蔗糖2%和蛋白胨0.5%)和9ml无菌水中(即稀释10倍),经恒温(25±1℃)振荡(100r·min-1)培养24h,测定孢子在营养液和清水中的萌发率. 2.4 用培养基糖作为总糖和蛋白质含量的培养基 将供试菌株接种于玉米麦麸(浸汁)培养液中,于25±1℃下振荡(100r·min-1)培养3d,过滤收集菌丝并用缓冲液清洗.将所得的菌丝置于120℃下烘至恒重,按前述方法测定菌丝总糖和蛋白质的含量,作为孢子内贮总糖和蛋白质的比较. 2.5 数据分析 本研究中的方差分析、相关分析及模型模拟等数据分析工作均采用唐启义和冯明光的DPS软件在计算机上完成. 3 结果与分析 3.1 不同贮藏温度对孢子粉总糖、总糖含量的影响 经测定,第一批未干燥粉的含水量为