三叶抗流感胶囊抗甲型h1n1流感病毒的研究.docxVIP

三叶抗流感胶囊抗甲型h1n1流感病毒的研究 流行感染（感染）是流感病毒引起的呼吸道感染，通常急性发作和传染性物质。主要经呼吸道飞沫迅速传播, 人群普遍易感, 流感抗原容易变异, 难于控制。临床表现来看为发热、全身乏力、鼻塞流鼻涕等症状。我国多见于18岁以下儿童及青少年, 发达国家好发于青壮年。 一叶抗流感胶囊是中药组方, 临床主要用于治疗流感, 曾用名和剂型为金蒿抗流感滴丸, 由新疆一枝蒿和贯叶金丝桃两味传统药材经现代工艺制成的复方制剂, 其中有效成分一枝蒿酮酸和金丝桃苷报道有利尿、咳嗽、解痉、降低血压、降低胆固醇、镇痛和保护心血管等作用。 研究发现该方剂在体内外均具有明显的抗流感病毒、抗炎、免疫调节和抑菌的作用。本研究体内采用两株甲型流感病毒 (H1N1亚型FM1株和PR8株) 感染小鼠造成病毒性肺炎模型, 观察一叶抗流感胶囊治疗性给药和预防性给药对小鼠病毒性肺炎的抑制作用, 观察其对小鼠生存天数和死亡率的影响;体外CPE法观察一叶抗流感胶囊对流感病毒FM1、PR8感染犬肾上皮细胞 (MDCK) 的作用。 1 材料表面 1.1 重41g ICR小鼠 (SPF/VAF级) , 体重 (14±1) g, 雌雄不限。由北京维通利华实验动物技术有限公司提供, 动物合格证SCXK (京) 2006-0009。 1.2 病毒病控制实验 甲型H1N1流感病毒鼠肺适应株 (FM/1/47株和PR/8/34株) , 购自中国疾病预防控制中心病毒病预防控制研究所, 由本生物安全实验室 (ABSL-2) 鸡胚传代, TCID50分别为10-4.5, 10-4, -80℃保存备用。 1.3 细胞 MDCK, 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院细胞中心, 本室传代液氮冻存。 1.4 cumperfratum两味药材的相关问题 一叶抗流感胶囊, 是由新疆一枝蒿Artemsia rupestris L.和贯叶金丝桃Hypericum perforatum两味药材按质量1∶1经乙醇提取, 大孔吸附树脂纯化得到, 药材鉴定人为黄华研究员 (新疆维吾尔自治区药物研究所, 专业为中药学) , 其有效成分为一枝蒿酮酸, 得率为38.02%, 由新疆西部加斯特药业有限责任公司生产, 生产批 性状:褐色胶囊内容物。 1.5 四川光计划在四川光计划设备公司5. 利巴韦林颗粒 (四川百利药业有限责任公司生产, 批号130710) , 抗病毒颗粒 (四川光大制药有限公司, 批号1302107-017) 。 1.6 细胞培养液 含10%FBS (天津市灏洋生物制品科技有限责任公司产品, 批号TBD31HB) , DMEM (Gibco, 900162) 。 1.7 美国al.18a2型生物安全柜 倒置相差显微镜 (日本Olympus) , CO2培养箱 (日本Sanyo公司) , MSC18A2型生物安全柜 (美国Thermo) , YP/0001电子天平 (上海越平科学仪器有限公司) , AR204电子天平 (美国Chaus) 。 2 方法 2.1 配置方法 体内试验时用0.5%羧甲基纤维素钠 (CMC) 溶液配制, 体外试验用高纯水配制、实验时用细胞维持液倍比稀释。 2.2 小鼠等效剂量 一叶抗流感胶囊人临床剂量为4.8 g·d-1, 按70 kg算, 即68.57 mg·kg-1·d-1。小鼠试验用量分别为1.5, 0.75, 0.38 g·kg-1·d-1, 分别相当于人临床用药量的2倍、等倍和1/2倍;利巴韦林临床用量为450 mg·d-1, 换算成小鼠等效剂量为0.07 g·kg-1;抗病毒颗粒临床用量为27g·d-1, 换算成小鼠等效剂量为4.24 g·kg-1, 试验时各药物按等容积20 m L·kg-1ig给药。 2.3 小鼠乙流感染fm1 小鼠按体重等级随机分为7组, 分别为正常对照组、病毒对照组、利巴韦林组、抗病毒颗粒组、一叶抗流感胶囊高、中、低3个剂量组 (1.5, 0.75, 0.38 g·kg-1) , 每组12只。除正常对照组外, 将小鼠用乙醚轻度麻醉, 以15个LD50流感病毒液 (FM1和PR8株) 滴鼻感染, 每只35μL。感染当天开始给药, 每次按20 m L·kg-1ig, 1次/d, 连续4 d, 正常对照组和病毒对照组同等条件灌胃给予0.5%CMC。第5天称体重后解剖称肺重, 计算肺指数及肺指数抑制率。 2.4 连续给药4周 小鼠按体重随机分为7组, 分组方法及给药方式同2.3, 每天1次, 连续4 d。最后1次给药后除正常对照组外, 对小鼠进行感染, 感染方法同2.3。感染后不再给药, 感染后第4天, 称取小鼠体重后解剖, 全肺称质量, 计算肺指数及肺指数抑制率。 2.5 叶抗气流胶囊组 取小