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猪链球菌2型人工感染对balbc小鼠的致病作用 猪链霉菌2号在世界许多国家都有报道。近年来，这种疾病在中国的危害日益增强。一些猪关节炎、神经症状和并发症在一些车间出现。一些人导致当地感染和当地人感染。猪链球菌2型的致病性与它的毒力因子关系密切, 其毒力因子比较复杂, 有溶菌酶释放蛋白 (MRP) 、细胞外因子 (EF) 、溶血素和荚膜等, 其中MRP、EF是许多致病性强毒株拥有而许多非致病性菌株没有的2个重要毒力因子。猪链球菌2型以常在菌的形式存在猪体某些部位, 如扁桃体等。调查结果表明, 从非疫区健康猪扁桃体所分离的猪链球菌2型菌多呈MRP-、EF-, 而从疫区健康猪分离的多呈MRP+、EF+。通常认为该菌对猪、兔、山羊敏感, 而对普通小白鼠、雏鸡、雏鸭、豚鼠等不敏感。该菌的动物致病性研究是对其毒力因子研究和疫苗研究的基础, 为此我们选择了不同来源和不同MRP、EF表现型的5个菌株, 对它们进行了BALB/c小鼠、猪、兔和普通小白鼠的致病性试验。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 子表现型及毒力因子 SS2-1、SS2-H、SS2-006444株:均分离自发病猪内脏器官和组织, 毒力因子表现型SS2-1、SS2-H株均为MRP+、EF+, SS2-006444株为MRP-、EF-;SS2-7株:分离于健康猪扁桃体, 毒力因子表现型为MRP-、EF-;SS2-N株:从国内引进的参考株, 毒力因子表现型为MRP+、EF*(为EF的类似物) 。 1.1.2 体重5g BALB/c小鼠:购自南京军事医学研究所, 小鼠体重15—20 g;猪、普通小白鼠、兔:均为本所猪场和实验动物场提供, 猪体重为50日龄, 小白鼠体重为20 g, 兔体重为1.5—2.0 kg。 1.1.3 h,h 以单个菌落接种含2.0 g/L葡萄糖、10 mL/L牛血清的马丁肉汤, 37.5 ℃培养18—20 h;在进行人工感染前取细菌培养原液0.1 mL加入灭菌生理盐水0.9 mL, 依次稀释至10-6, 然后取0.2 mL菌液涂布于已制备的血琼脂或巧克力琼脂平皿, 在37 ℃培养18—20 h后计算平皿上生长菌落, 以其菌落数乘以0.5×107即为活菌浓度 (CPU) 。 1.2 方法 1.2.1 猪同剂量注射组 猪:试验用猪12头, 分为6组, 2头/组, CPU依次为13.3×108/mL (原液组) 、13.3×107/mL、13.3×106/mL、13.3×105/mL、13.3×104/mL和对照组, 均为猪耳静脉注射, 1 mL/头, 对照组猪同剂量注射灭菌生理盐水。兔和普通小白鼠:将培养菌液CPU调为8.0×108/mL, 分别于兔背部皮下及小白鼠腹腔注射, 1 mL/只, 2只/组。BALB/c小鼠:试验用小鼠10只, 分为5组, 2只/组, CPU依次为6.5×108/mL (原液组) 、6.5×107/mL、6.5×106/mL、6.5×105/mL和对照组, 均采用腹腔注射, 1 mL/只, 对照组小鼠同剂量注射灭菌生理盐水。 1.2.2 小鼠的攻毒试验 将SS2-H、SS2-006444、SS2-7、SS2-N株菌液CPU分别调至9.8×108/mL、5.3×108/mL、9.4×108/mL、2.8×108/mL, 定为各组的各株菌原液组, 再将各株菌CPU按1∶10、1∶100、1∶1000稀释, 同时设各株菌的对照组, 2只/组, 1 mL/只, 腹腔注射, 对照组注射同剂量灭菌生理盐水。于攻毒后21—40 d对部分耐过BALB/c小鼠用SS2-1株菌液CPU为3.5×107/mL 腹腔注射, 1 mL/只, 同时设2只小鼠为攻毒对照组。 以上试验动物于攻毒后观察其死亡、症状等, 观察21 d;对死亡动物取心血接种血平板分离培养, 进行菌落形态和革兰氏 染色等方法鉴定。 2 结果 2.1 sd-1对四种动物的疾病 2.1.1 猪s2-1对猪的致病性 将不同稀释度SS2-1接种试验猪后, 在试验期内CPU为13.3×108/mL (原液) 组死亡2头;13.3×107/mL组死亡2头;13.3×106/mL组1头猪无明显变化, 另1头猪于2—6 d出现跛行、减食等, 以后症状消失;13.3×105/mL组1头猪无变化, 另1头猪在2 d出现跛行于第6 d症状消失, 并出现头偏向一侧的神经症状;13.3×104/mL组和对照组猪均表现正常。从试验结果可以看出, SS2-1株对猪有致病性, 经计算LD50为4.2×107;ID50为1.33×106。同时从病死猪内脏分离到与接种菌相同的细菌。 2.1.2 小鼠接种后感染 用CPU为8.0×108/mL接种兔和普通小白鼠, 接种后兔和普通小白鼠仅出现一过性精神萎顿, 6 h后