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不同抗冷力籼稻品种的叶绿素荧光分析 植物光的抑制现象在自然界很常见。由于低温的低温威胁，植物光合器官对光的利用的能力降低，过度光的积累会导致植物光的抑制或加剧植物的伤害。早期的研究注重光抑制对植物伤害的一面。最近人们发现植物光抑制的发生不完全是伤害的结果,也表现为光合机构防御伤害的保护性反应。在植物PSⅠ和PSⅡ中都存在依赖叶黄素循环并以热的形式耗散过量激发能的机制。光合作用对光抑制的敏感性在水稻品种间存在明显的差异,其中籼稻是对低温和光抑制敏感的种类。光合机构吸收的光能可以通过光化学能量转换、荧光发射和非辐射能量耗散等方式消耗掉。光化学能量转换引起的荧光猝灭被称为光化学猝灭。非辐射能量耗散等引起的荧光猝灭被称为非光化学猝灭。DTT(紫黄质脱环氧酶的专一性抑制剂)能抑制叶黄素循环中玉米黄质的形成。为此,我们以具不同抗冷力的籼稻品种青华6号(冷敏感)和桂山矮选3(抗冷)的抽穗期剑叶为材料,进行低温光抑制胁迫以及DTT处理,用PAM调制荧光仪检测叶片叶绿素荧光参数Fo、Fm、Fv/Fm以及光化学猝灭qP和非光化学猝灭qN的变化,以期探讨不同抗冷力的籼稻品种防御低温光抑制伤害的机制。 1 材料和方法 1.1 冷品种冷品种 籼稻青华6号(冷敏感品种)和桂山矮选3(抗冷品种)由广东省农业科学院水稻研究所提供。种子催芽萌发后播于大田,采用自然光照和一般肥水管理措施,待水稻抽穗后取剑叶进行试验处理。 1.2 叶片培养液 大田随机取样40片剑叶,每片剪取中间部位2 cm长的片段,放入有湿润滤纸的培养皿中,每个培养皿8个叶片段。为保持叶片湿度,培养皿加盖,于1℃和150 μmol/m2·s光量子强度的光照下或1℃和黑暗下分别处理12、24、36、48 h,处理后的叶片放回到28℃和20 μmol/m2·s光下恢复5 h。 1.3 低温光抑制胁迫处理 用4 mmol/L DTT(二硫苏糖醇)+0.04%吐温20溶液浸泡剑叶片段于常温弱光下预处理4 h。对照以0.04%吐温20溶液同样预处理,然后按上述处理同时进行低温光抑制胁迫24 h。处理后的叶片放回常温弱光下恢复5 h。 1.4 饱和脉冲光催化作用 用PAM调制荧光仪在常温下测定光照低温处理、黑暗低温处理和DTT处理前后及恢复后叶片的初始荧光Fo和最大荧光Fm,计算Fv/Fm,测定光强0.01 μmol/m2·s,饱和脉冲光强4500 μmol/m2·s。测定前叶片黑暗适应15 min,叶绿素荧光猝灭分析根据Van Kootenm和Shel方法进行,诱导荧光达稳态后给予饱和脉冲(4500 μmol/m2·s,2 s),根据qP=(F′-F)/(Fm′-Fo′),qN=(Fm′-Fo′)/(Fm-Fo)公式计算光化学猝灭(qP)和非光化学猝灭(qN)。实验均重复3次以上。 2 结果 2.1 低温对红树莓原汁fo和fv/fm配比的影响 离体剑叶分别经1℃和光照(150 μmol/m2·s)以及1℃和黑暗下处理12、24、36、48 h,与处理前对照比较,低温处理引起初始荧光Fo上升,Fv/Fm比值下降。Fo上升和Fv/Fm下降的幅度,光照低温比黑暗低温处理明显地较大。而且这种影响随着低温光胁迫时间的延长愈来愈显著,两个品种有相同的变化趋势。这表明在低温光胁迫下,除了低温伤害之外,同时发生了低温诱导的光抑制伤害。 2.2 桂山矮选3、5h后g/fm的变化 籼稻青华6号和桂山矮选3经低温光抑制胁迫24 h后,与黑暗低温处理相比,低温引起的Fo上升和Fv/Fm下降,光照低温比黑暗低温处理明显。从品种比较看,桂山矮选3比青华6号Fo上升和Fv/Fm下降的幅度更显著一些,但在常温弱光下恢复5 h后,桂山矮选3比青华6号恢复较快(表2)。荧光猝灭qP和qN在低温光抑制发生和恢复过程中亦有相似的变化趋势,qP是桂山矮选3比青华6号下降较多,qN是桂山矮选3比青华6号增加较明显。 但在常温弱光下恢复5 h后,桂山矮选3比青华6号的qP恢复较快,qN下降较明显(图2)。这表明桂山矮选3比青华6号有较强的调节或防御低温光抑制能力。 2.3 dtt处理前后青华qp、qn的变化 籼稻剑叶经低温光抑制胁迫后,DTT预处理与未经处理的剑叶比较,低温光抑制胁迫引起的Fo上升是DTT处理的明显。Fv/Fm比值是DTT处理比未经DTT处理的下降较多,恢复较慢(表3)。荧光猝灭qP和qN在光抑制发生和恢复过程中,DTT处理对qP影响不大,但明显地引起了qN的下降。从品种比较看,DTT处理比未经DTT处理的青华6号的qN多下降9.8%,桂山矮选3的qN多下降13.2%。这表明DTT处理明显地抑制了叶黄素循环玉米黄质的形成,而且桂山矮选3比青华6号受抑制明显,但恢复较快一些(图3)。 3 阳生植物光保护作用 在植物光抑制的研究中,人们