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复方中药对肥胖模型小鼠的降脂健脾作用 中医是中国的传统医学。其基本理论可以概括为“整体观念、辨证论治”。换句话说，人体是一个有机的整体，通过区分和识别未知的“证据”，我们可以从根本上治疗疾病。历代医家认为, 肥胖病与气虚、痰、湿、淤有关。引起肥胖的原因有外感 (湿邪) 、食伤 (过食肥甘) 和正虚 (脾虚) 等因素。主要是脾胃受损、脾不散精, 或脾肾不足, 水道不利, 变生膏脂痰湿, 郁积体内而成肥胖。因此, 脾肾功能失调是肥胖病的病理基础。本研究通过高脂饮食构建小鼠营养失衡的肥胖模型, 选用可益气健脾且安全无毒副作用的中药材组成复方, 研究该复方中药的减肥、降脂及健脾作用, 现将结果报道如下。 1 材料和方法 1.1 试剂和仪器 试验动物:35日龄昆明种雌性小鼠50只, 购自第四军医大学。 试剂:甘油三酯 (TG, 酶终点法) 、总胆固醇 (TCH, 酶终点法) 、高密度脂蛋白-胆固醇 (HDL-C, PTA-Mg2+沉淀法) 的测定试剂盒, 均购自温州东瓯津玛生物科技有限公司;西布曲名, 购自陕西森弗生物技术有限公司;DMSO购自Sigma公司;RNA提取试剂盒TRIZOL和DL2000 DNA Marker购自天根生化公司;反转录试剂盒RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit和Taq酶购自Fermentas;MIX购自WOLSEN。其余试剂均为分析纯。 供试药物:3 g/mL的复方药物浸膏 (荷叶15%、海藻10%、黄芪20%、白术20%、茯苓20%、山楂15%) 。 基础饲料:面粉380 g/kg, 玉米粉200 g/kg, 麸皮160 g/kg, 豆粕150 g/kg, 鱼粉40 g/kg, 骨粉30 g/kg, 酵母、食盐、鱼肝油和微量元素添加剂各10 g/kg。高脂饲料:在普通日粮的基础上添加200 g/kg猪油即得高脂饲料。 1.2 小鼠的造模试验 将50只小鼠随机分成2组, 第1组15只, 饲喂基础饲料, 第2组35只, 饲喂高脂饲料, 连续饲养2周。2周后若高脂饲料喂养小鼠的体质量超过基础饲料组小鼠的20%, 则可作为肥胖模型试验小鼠。从第1组中随机选取10只小鼠, 作为普通对照组 (Ⅰ组) ;将第2组中造模成功的30只小鼠随机分成3组, 分别为模型对照组 (Ⅱ组) 、阳性对照组 (Ⅲ组) 和药物组 (Ⅳ组) 。Ⅰ、Ⅱ组小鼠以蒸馏水灌胃, 用量0.2 mL/ (只·d) ;Ⅲ组小鼠以6.5 mg/mL西布曲名溶液灌胃, 0.2 mL/ (只·d) ;Ⅳ组小鼠以复方中药浸膏灌胃, 0.3 mL/ (只·d) 。灌胃期间, Ⅰ组给予基础饲料, Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组给予等量的高脂饲料 (饲料给予量以多数动物吃完为原则) 。试验期间小鼠自由饮水, 饲养环境温度为室温。试验共进行20 d, 第21天进行小鼠抗疲劳试验, 结束后摘眼球采血并处死小鼠, 取各组小鼠体脂及Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ组肝脏备用。 1.3 中药疗效试验 1.3.1 体质量及脂肪系数 给药前, 测量各组小鼠体质量 (始质量) 和体长, 计算李氏指数以反映小鼠的肥胖程度;给药期间, 每天观察小鼠的活动情况、体毛色泽、饮食、饮水及粪便形状等;20 d后, 测量各组小鼠体质量 (终质量) 和体长, 计算李氏指数和体质量增长率。试验结束后处死小鼠, 剖腹取体脂 (肠系膜及肾周脂肪垫) 并称质量, 计算脂肪系数。 李氏指数=[体质量 (g) ×1 000]1/3/体长 (cm) ; 体质量增长率= (终质量-始质量) /始质量; 脂肪系数=体脂质量/终质量。 1.3.2 小鼠的水中采集 小鼠抗疲劳试验:给药20 d后, 小鼠禁食16 h, Ⅰ、Ⅱ组灌以蒸馏水, Ⅲ、Ⅳ组灌以相应药物, 30 min后, 将小鼠放入水桶中 (直径30 cm, 深40 cm, 水深20 cm, 水温28 ℃) 。当小鼠在水中游泳至过度疲劳不动、鼻孔刚刚淹没于水下时判作溺死, 然后捞出。将小鼠入水至溺死所经历的时间作为抗疲劳试验指标。 1.3.3 血清中tg、tch和hdl-c表达的测定 小鼠给药20 d后, 摘眼球采血。血液放入离心管静置2 h后, 2 000 r/min离心10 min, 取上清液得血清, 按照生化试剂盒的操作说明书测定血清中TG、TCH和HDL-C的浓度。 1.4 中药对大鼠肝脏fas基因mrna的影响 1.4.1 总ra的提取 采用Trizol试剂盒提取小鼠肝脏组织总RNA, 用10 g/L琼脂糖凝胶检测RNA的完整性。 1.4.2 pcr检测n基因序列 根据GenBank公布的小鼠FAS和β-actin基因序列, 采用Premier 5.0软件设计各基因的PCR引物。引物由北京华大基因公司合成, 其具体序列、退火温度、循环数及扩增