白细胞介素-2的生物学功能.docxVIP

白细胞介素-2的生物学功能 1 发现条件下发现的,在情况下下下下下发现了条件下发现 在研究t细胞的长期存在的条件下发现了白介素-2（il-2）。1976年Morgan等人用丝裂原(植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(Con)A等)刺激T淋巴细胞产生一种因子,当时命名为T细胞生长因子(TCGF)并于1979年在国家淋巴因子会议上正式命名为白细胞介素-2。 2 半胱氨酸残基的修饰 在体内白介素主要由活化的I型辅助淋巴细胞THI细胞分泌,在白介素基因表达的由153残基组成的前体中,N端20个氨基酸残基组成信号肽,在分泌时被切除。天然人IL-2是一个133个氨基酸残基组成的多肽,为分子量大约有15kDa的糖基化蛋白。等电点(PI)为6.5~8.0,有3个半胱氨酸残基(Cys),分别位于第58、105和125位。因此翻译后修饰还包括Thr位点的糖基化和在第58位与第105位残基形成二硫键。糖基化与否对蛋白活性没有影响,而正确的二硫键对活性是必须的,因此重组的IL-2通常将125位游离的半胱氨酸残基突变为丝氨酸或者丙氨酸,这样就有利于重组蛋白产生正确的二硫键。 IL-2对热较稳定,56℃1h,37℃12h或70℃15min处理仍保留活性,4℃可保存1年以上,其活性在pH2~9范围内保持稳定。IL-2对蛋白酶敏感,对DNA酶、RNA酶和神经氨酸酶不敏感。 3 rkat细胞系的生物学作用 人的白介素-2产生细胞有末梢血淋巴细胞、脾细胞、扁桃腺细胞、骨髓细胞和人白血病来源的传代jurkat细胞系。 白介素的生物学作用以刺激T细胞增生为主,除此之外还有其他重要功能如促T细胞增殖;维护整个NK细胞的活化、分化和增殖,调节NK细胞保持它的自然杀伤力;诱导细胞毒性T淋巴细胞产生和增殖;诱导淋巴因子活化淋巴细胞产生;促B细胞增殖分化作用;以及与其它白介素等的协同作用。 4 cd25链 IL-2通过效应细胞膜上的IL-2受体发挥作用。IL-2受体(IL-2R)有P55,P70,P64这3个亚单位,分别命名为IL-2Rα (CD25)链,IL-2Rβ链(CD122)和IL-2Rγ链。IL-2Rα链与IL-2低亲和力结合,而且不具备信号传递功能;IL-2Rγ不单独与IL-2结合,只有在IL-2R的α、β和γ3者结合或β和γ结合后才显示出与IL-2的高亲和性;信号传递功能与β和γ有关,更多的是与γ有关。3条链中α链表达在静止T细胞中,β链表达在静止T细胞、NK细胞、B细胞与前T细胞中,而且都在激活后显著提高表达水平。 5 基因重组il-2抗剂或抗剂 1983年Taniguchi首次成功克隆了人的白介素-2的cDNA使得IL-2的大量生产和研究成为可能。目前利用DNA重组技术,已经在大肠杆菌、酵母、猴COS细胞和昆虫细胞中获得表达有活性IL-2,目前人IL-2已经全部采用基因工程的方法生产。 90年代初IL-2在美国问世,1991年,中国科学院上海生化研究所和军医医学科学院承接了“八五”重点攻关课题——基因重组白细胞介素-2。中国科学院上海生化研究所根据在表达质粒中PR与PL正向串联与反向组合,其表达率基本相同但加终止信号是有益的,且终止密码子与终止信号之间的距离,以及IL-2基因3`端的长短,对表达效率影响很大,构建了表达IL-2的pLY-4质粒,表达水平可达50%,经纯化后蛋白的比活性可以达到1.6~2.2×107。此课题于1994年获一类新药证书,卫生部批准按照GMP标准试生产,并在指定医院进行临床试验,随后基因重组白细胞介素-2通过卫生部组织的第三期临床审定,首批获得正式生产文号。这是我国继干扰素后第二个正式进入市场的基因工程高科技药品。 虽然以大肠杆菌作为宿主表达IL-2取得了很大成功,但是由于原核生物与真核生物之间的巨大差异,使得它的应用受到了限制。从1997年开始,发展了酵母细胞表达系统,特别是巴斯德毕赤酵母的应用使得IL-2的品质进一步得到提高。 进年来,虽然基因工程IL-2应用于肝炎及某些癌症的治疗已取得令人瞩目的成果,但大剂量、长时间用药对病人仍存在一定的毒副作用,如发热、寒战、呕吐、头晕和毛细管综合征等。因此有必要定向改造IL-2的结构使其成为具有高活性、低毒性的超级IL-2或者具免疫功能的拮抗剂或部分拮抗剂。如有报道的通过蛋白质工程技术将125位Cys突变为Ala、18位Leu突变为Met、19位Leu突变为Ser来提高蛋白的稳定性和活性。而15位突变为Val和26位突变为Asp的改造IL-2基本无生物活性却对IL-2与受体结合有抑制作用,但拮抗能力较低,是部分拮抗剂。 另外令人瞩目的研究方向还有IL-2的融合蛋白。中国科学院上海生化研究所通过基因工程手段将IL-2基因与毒素基因连接起来构成融合基因,然后在原核中高效表达,得到IL-2-PE