丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用.docxVIP

丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用 添加剂对酶的抑制作用包括可逆性抑制和非可逆性抑制。可逆性抑制是指由添加剂和酶组成的共价组合，这些添加剂可以去除添加剂，恢复酶的活性，如透析反滤和过滤等物理方法。竞争抑制作用是一种可逆性抑制，即添加剂与底物类似，能与底物分子竞争，以占用酶的活动中心，使底物分子不能与酶的活动中心结合，从而抑制酶的活动。竞争性抑制剂的抑制程度取决于抑制剂与底物浓度的相对比例。当抑制剂浓度不变时, 抑制程度随底物浓度的增加而减弱, 最终可以通过加入大量底物, 提高底物的竞争力, 消除竞争性抑制剂的抑制作用。 1 不同推进合成系统中丙二酸抑制剂对实验结果的影响 验证酶的竞争性抑制作用的经典实验是:丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用。琥珀酸脱氢酶催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸;丙二酸的分子结构与琥珀酸类似, 所以可与琥珀酸竞争性与酶的活性中心结合, 是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂。丙二酸与琥珀酸脱氢酶的亲和力远大于琥珀酸本身对它的亲和力, 因此抑制作用很强。在隔绝空气的条件下, 脱下的氢被受氢体甲烯兰接受, 还原为甲烯白, 由蓝色转变为白色, 在总的反应体系体积相同时, 可以通过颜色退去的快慢来衡量反应体系内部脱氢反应的快慢, 同时也可以判断丙二酸对琥珀酸脱氢酶活性的抑制程度。该实验的具体操作见表1。 加好后摇匀, 滴加石蜡以隔绝氧气, 37℃水浴随时比较, 观察各管颜色退色顺序。结果如下:1号管体系中含有正常底物和酶, 因而退色最快;2号管由于含有丙二酸抑制剂所以退色比1号管慢;三号管由于没有加入琥珀酸脱氢酶, 所以颜色不变;4号管退色速度介于1号和2号管之间, 原因是体系中含有丙二酸抑制剂, 且在含有的抑制剂浓度相同的情况下, 4号管底物浓度比2号管增大一倍, 因此部分减弱了抑制剂的抑制作用, 所以退色速度比2号管快。可见, 这个实验确实验证了竞争性抑制作用的部分性质, 即:竞争性抑制作用的抑制程度取决于抑制剂与底物浓度的相对比例, 当抑制剂浓度不变时, 增加底物浓度, 可减弱抑制剂的抑制程度。 2 实验操作的改进 经典实验中2号管加入的正常底物琥珀酸钠的滴数和加入的抑制剂丙二酸钠的滴数相同, 尽管溶液丙二酸钠的百分比浓度比琥珀酸钠的百分比浓度低, 但这种等滴数加入的实验设计并不能形象地说明丙二酸对琥珀酸脱氢酶的强烈抑制作用。根据《生物化学》 (第6版) 记载, 丙二酸与酶的亲和力远大于琥珀酸与酶的亲和力, 当丙二酸浓度为琥珀酸浓度的1/50时, 就可以抑制50%的酶活性。为了让学生直观的意识到这种强烈的抑制作用, 笔者对本实验操作进行了改进, 见表2。 加好后摇匀, 滴加石蜡隔绝氧气, 37℃水浴随时比较各管颜色退色顺序。结果同前, 解释同前, 但这样的改进可让学生通过20∶1这样形象的比例领会丙二酸对琥珀酸脱氢酶的强烈抑制作用, 同时也说明丙二酸对琥珀酸脱氢酶的亲和力比琥珀酸本身要大得多。 另外, 从理论上推断, 当正常底物浓度加入到足够高, 并能够在瞬间将体系中的酶分子完全饱和时, 那么抑制剂的抑制作用将没有机会发挥, 反应速度必将达到与未加抑制剂的1号管相同, 但问题是:底物浓度究竟要增加到抑制剂浓度的多少倍才能达到这种效果呢?笔者为此进行了多次尝试, 当琥珀酸钠加到100滴, 而丙二酸钠加入1滴, 并用蒸馏水调节总滴数相同时, 反应速度仍然比1号管略慢。由于加入滴数太多, 操作中容易产生视觉疲劳, 不适合在学生中大范围开展, 因此作罢。但可以肯定的是, 要达到与1号管反应速度相同, 至少加入琥珀酸钠的滴数是加入的丙二酸钠滴数的100倍以上, 这也从另一个侧面说明了丙二酸对琥珀酸脱氢酶的强烈的抑制作用。 生物化学是一门实验性学科, 培养具有扎实的理论基础及过硬的分析问题、解决问题能力的生物化学技术人才, 是生物化学实验教学的主课题。作为高校教师, 应该在工作中勤于思考, 善于将理论知识与实验教学紧密结合, 即使在一个司空见惯的经典实验中, 也可以得到更好的教学效果。