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薄皮甜瓜成熟特性、香气物质及香气合成相关酶活性比较 0 不同品种薄皮甜瓜香气成分分析 [研究意义]细皮瓜是中国重要的品种之一。它以其独特的风味、优良的口感和独特的外观深受消费者欢迎。芳香物质是甜瓜果实中最具有价值的部分,是衡量薄皮甜瓜品质的重要指标之一。不同种类、品种、乙烯、成熟度、呼吸强度等都会导致果实香气差异较大。果实中芳香物质的形成是一个动态的过程,随着果实的发育,芳香物质的组成和含量会发生变化,对其进行深入研究将对甜瓜品质育种具有指导意义。【前人研究进展】国外对厚皮甜瓜果实挥发性物质进行了大量研究,已表明其果实含有240多种挥发性物质,主要为酯类、醛类、醇类及含硫化合物等,其中约100种物质得到了鉴定。Aubert等分析15个Charentais甜瓜品种时发现,不同货架期和成熟期的品种,其香气种类和含量存在差异。Kourkoutas等分析了‘Cantaloupe’、‘Galia’和‘Honey Dew’其芳香组分发现:‘Cantaloupe’甜瓜中含有大量的含硫酯类和直链六碳化合物,而‘Honey Dew’甜瓜以1种九碳直链化合物为主,‘Galia’甜瓜中甲基酯类相对较高。刘勇等对5大类群薄皮甜瓜代表品种‘玉美人’、‘龙甜3号’、‘高甜黄金道’、‘日本甜宝’和‘香沙蜜’进行比较时发现,果实成熟时香气以酯类物质为主,同时含有少量的醛类、酮类、醇类、酸及其它。各香气成分种类、含量和相互之间构成比例的差异是导致薄皮甜瓜果实风味不同的原因。唐贵敏等发现‘山农金黄1号’成熟甜瓜果实挥发性物质主要为酯类物质,而‘Sweet delight’成熟果实挥发性物质主要为醛类物质。这也说明甜瓜品种间的香气差异较大,不同品种香气成分不同。脂氧合酶(lipoxygenase,LOX)、醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)和醇酰基转移酶(alcohol acyltransferase,AAT)是香气物质合成过程中的3个关键酶。隋静等证明‘丰香’草莓的AAT酶活性显著高于‘罗莎’。Zhu等对‘金冠’和‘澳洲青苹’苹果的研究发现,‘金冠’果实中4个基因Md AAT1、Md AAT2、Md AAT3和Md AAT4表达比‘澳洲青苹’强烈,其中主要表达的是Md AAT1和Md AAT2,这两种基因表达水平随果实成熟逐渐升高,并与检测到的酯类总量保持一致。【本研究切入点】薄皮甜瓜与厚皮甜瓜相比,香气更加浓郁,而且品种繁多,但香气类型不同,造成不同品种薄皮甜瓜香气差异的原因尚不明确。【拟解决的关键问题】本试验通过对香气类型不同的2个薄皮甜瓜品种芳香物质及其相关指标的测定,以期为科学评价和鉴定甜瓜的品质奠定基础,并为甜瓜品质育种提供可以借鉴的依据。 1 材料和方法 1.1 试材与方法 以薄皮甜瓜(Cucumis melo var.makuwa Makino)‘彩虹7号’(浓香型)和‘日本甜宝’(清香型)作为试材,于2009年8月—11月在沈阳农业大学园艺科研基地日光温室内栽培。采用桶栽,两行为1个小区。栽培过程中采用单蔓整枝,于10—14节位留瓜,单株留瓜2个。雌花开花当日上午用“沈农丰产剂2号”喷花,并挂牌标记开花日期。分别于花后25、30、33和35 d取节位相同的果实,进行相关指标的测定与分析。两品种果实生理成熟期为:‘彩虹7号’花后33 d,‘日本甜宝’花后35 d。 1.2 测量设计和方法 1.2.1 水果硬度和可溶性固形物含量的测定 果实硬度采用FHM-1型果实硬度计(底部直径为12 mm),测定果实中部(带果皮);可溶性固形物:手持折光仪测定。 1.2.2 呼吸速率的测定 抽取甜瓜瓜腔中乙烯,用Varian GC-3800气相色谱仪进行测定,重复3次。分析条件:GDX-102色谱柱,FID检测器,不分流进样,柱温为100℃,FID检测器温度为120℃,载气为氮气,柱流量20 m L·min-1。 呼吸速率测定参照毛志泉等的方法,仪器采用英国HANSATECH公司生产的液相Oxy-Lab型氧电极。测定时用双面刀切取赤道区附近果皮下果肉,迅速称取0.10 g放入反应杯,加盖并启动测量程序。反应杯中反应液温度用恒温浴控制在25℃,3次重复。 1.2.3 lox、adh、aat活性的测定 取花后25、30、33和35 d的两品种甜瓜的果皮和果肉,进行3种酶活性测定。LOX活性参考陈昆松等的方法;ADH活性参照Longhurst等的方法;AAT活性参照Fellman等和Pérez等的方法,稍加改进。蛋白质含量测定采用考马斯亮蓝G-250比色法。 1.2.4 纯nacl和内标溶液的配制 将样品解冻后榨成匀浆吸取10 m L放入20 m L顶空瓶中,添加3.5 g分析纯Na Cl和内标1-辛醇,加盖并压好,振荡使其溶解。将老化好的