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浊点萃取法分离富集环境中的痕量金属元素 随着科学技术的发展，在地质、环境、生物、食品等样品中测定痕迹金属元素的情况通常需要达到10-9级或10-12级左右。分析样品中组分的含量较低，对基本体干扰较大。因此，有必要通过分离和提取方法来提高分析方法的灵敏度和选择性。近年来,在以往研究的基础上经过不断创新,开发出了液膜萃取、固相微萃取、浊点萃取、顶空液相微萃取、超临界液体萃取、微波辅助萃取等新型萃取技术。 浊点萃取(cloud - point extraction,简称CPE)法是近年来出现的一种新兴的液 - 液萃取技术,它不使用挥发性有机溶剂,不影响环境,以中性表面活性剂胶束水溶液的溶解性和浊点现象为基础,通过改变实验参数如溶液的pH值、离子强度、温度等引发相分离,将疏水性物质与亲水性物质分离。浊点萃取具有萃取效率高、富集因子大、操作简便、安全、经济、便于实现联用等优点,现在已经广泛地应用于生命科学、环境科学等研究领域中。 1 浊点萃取法 浊点萃取主要是运用表面活性剂的两个重要功能增溶作用和浊点现象。即在一定的温度范围内,表面活性剂易溶于水成为澄清的溶液,而当温度升高(或降低)一定程度时,溶解度反而减小,会在水溶液中出现混浊、析出、分层的现象,利用此现象萃取的方法称为浊点萃取法。表面活性剂分子通常由疏水基和亲水基两部分组成。溶液中的疏水性物质与表面活性剂的疏水基团结合,经放置或者离心分离形成两相:一相是被萃取进入表面活性剂,形成量少(一般为100～200 μL)且富含被萃取物的表面活性剂相;另一相是亲水性物质留在水相中,形成量大且表面活性剂胶束含量为临界胶束含量的水相。再经两相分离,就可将样品中的物质分离出来,这种萃取方法就是浊点萃取(cloud - point extraction,简称CPE)。 2 废水处理与环境样品的研究 2.1 在环境分析中的浊点萃取 对于组分复杂的环境样品,可采用浊点萃取技术对样品中的痕量金属元素进行浓缩和预富集。HIROTO WATANABE 等最早提出将浊点技术应用于金属离子测定,主要是用于金属鳌合物的分离,用PONPE - 7.5作表面活性剂,研究并从水中富集了锌离子。 金属分析中的浊点萃取技术的操作步骤非常简单,即在待测样品试液中加入络合剂和表面活性剂,样品中的金属离子与络合剂结合生成络合物,加入适当的添加剂,在水浴中加热至浊点,再趁热离心分离,冷却后去除水相,将胶束相进行适当的稀释,就可直接测定。 浊点萃取在痕量元素的分离与富集中得到了广泛的应用,它与火焰原子吸收分光光度法、石墨炉原子吸收分光光度法、等离子发射光谱、紫外 - 可见分光光度法相结合,近年来,发展起来的与高效液相色谱和毛细管电泳的联用技术,能准确地测定出环境样品中痕量金属元素的含量。该方面的相关研究见表1。 2.2 萃取-毛细管电泳 浊点萃取技术应用于环境中各种挥发性碳化合物、苯及其同系物、多环芳烃和酚类化合物等污染物的富集、分离,使其测定具有较高的灵敏度。宋冠群等首次将浊点萃取 - 毛细管电泳应用于多环芳烃的分析中,解决了表面活性剂存在背景吸附和吸收的问题,并详细考察了浊点萃取和毛细管电泳的分析条件,此法成功地应用于多芳烃等实际样品的测定,结果令人满意。表2总结了浊点萃取在部分环境污染物样品前处理中的应用实例。 3 促进牛血清蛋白和血红蛋白的定量萃取 浊点萃取技术可用于分离膜蛋白、酶、动植物和细菌的受体,还可与色谱法联用替代硫酸铵分级法作为纯化蛋白质的最初步骤。最早是由BORIOER将浊点萃取应用于生物学领域中,采用非离子表面活性剂Triton X - 114成功分离出乙酰胆碱酯酶、噬菌调理素、细菌视紫红质、细胞色素c氧化酶等内嵌膜蛋白。采用浊点萃取法成功分离出乙酰胆碱酯酶、噬菌调理素、细菌视紫红质、细胞色素c氧化酶等内嵌膜蛋白,还实现了牛血清蛋白(BSA)和牛血红蛋白的定量萃取。例如CHIANG等在温度22.8℃,表面活性剂为C14E5/C14E6的条件作用下,成功地分离出了外围蛋白胆固醇酯酶;Tani 等在活性剂为Triton X - 114,Tris/HCl缓冲液及pH 7.4,葡聚糖硫酸盐的实验条件下,成功地分离出了细胞色素b5;SIRIMANNE 等在表面活性剂Genapol X - 80 ,16% NaCl试剂,在50℃加热10 min,用乙腈去除共萃物后,用HPLC - UV分析血浆,从人血液和血浆中成功萃取出维生素A和E。 浊点萃取可以用来表征蛋白质,通过表面活性对目标蛋白的萃取效率来判断蛋白质的类型,还可以通过改变pH,引入配体和酶后,可观察蛋白质在两相间分配的变化,了解其构象变化来研究,翻译表达后蛋白修饰及特定体系中蛋白 - 蛋白间作用力的大小。 作为生物样品前处理方法,浊点萃取能与高效液相色谱、紫外吸收光