荞麦叶黄酮对2型糖尿病大鼠降血糖和改善胰岛素抵抗的作用.docxVIP

荞麦叶黄酮对2型糖尿病大鼠降血糖和改善胰岛素抵抗的作用 2型糖尿病（t区）是由多基因遗传因素和环境因素综合作用引起的水生植物代谢性疾病。其病理生理表现为胰岛素抵抗，胰岛素抵抗（r）是其主要诱导因素。该病发病率高,严重威胁着人类的健康,对其防治在世界范围内颇受重视。目前多数临床药物主要是对症治疗,降低血糖,虽有一定疗效,但远期疗效较差。前期研究发现荞麦花叶黄酮(flavones of buckwheat flower and leaf,FBFL)具有降糖、降脂、抑制体内外糖基化终产物的形成等作用,在此基础上,进一步观察FBFL对实验性2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠的作用,探讨其防治糖尿病的可能机制。 1 材料表面 1.1 培养基和试剂 荞麦花叶为甜荞麦子粒收割后自然干燥的花叶(来自内蒙古库伦旗),其水提取物,经乙醇溶解过滤后,用旋转蒸发器回收乙醇,浓缩干燥即得荞麦花叶总黄酮(经中国科学院药物研究所鉴定为黄酮类,总黄酮含量为98%)。罗格列酮(葛兰素史克有限公司,批,四氧嘧啶(alloxan) (美国Sigma公司),胰岛素(江苏万邦生化医药股份有限公司,批,胆固醇(北京双旋微生物培养基制品厂),蔗糖(北京拜尔迪生物公司),L-谷氨酸钠(北京拜尔迪生物公司),1,2-丙二醇(天津北方天医化学试剂厂,分析纯)。考马斯亮蓝试剂盒(Sigma公司),游离脂肪酸(南京建成生物工程研究所),胰岛素放射免疫分析药盒(原子高科股份有限公司),PTP1B兔抗鼠抗体及组化配套试剂(香港先进技术工业有限公司)。 1.2 仪器、检测设备 Optium安妥血糖仪及安妥超越血糖试纸(美国雅培), FT630G型微机多探头放免仪(北京市核仪器厂), GL-20G-Ⅱ型高速冷冻离心机(上海医用分析仪器厂),日立7150全自动生化分析仪(日本), 722型分光光度仪(北京), MP200A型电子天平(上海), Motic Med 6.0数码医学图像分析系统(北京航空航天大学), HL-1型恒流泵(上海市呼四仪器厂)。 1.3 动物 清洁级雄性Wistar大鼠,体重(200±20)g,中国医学科学院实验动物研究所提供,合格证号SCXK11-00-0006。 2 方法 2.1 氧吡啶的注射 大鼠70只,随机抽取10只作为正常组,每天灌胃蒸馏水,其余60只每天灌胃脂肪乳(猪油2 g,胆固醇0.5 g,谷氨酸钠0.1 g,蔗糖0.5 g,果糖0.5 g,吐温2 mL,丙二醇3 mL,丙硫氧嘧啶0.1 g,加水至10 mL) 2 mL·kg-1·d-1,第14天开始腹腔注射四氧嘧啶,隔日1次,共3次(第1次120 mg·kg-1,第2,3次各为100 mg·kg-1),每次注射四氧嘧啶15 min后,腹腔注射胰岛素0.4 U,并分别于给四氧嘧啶后2.5,5 h灌胃给25%葡萄糖10 mL·kg-1。同时继续灌胃脂肪乳。末次腹腔注射四氧嘧啶72 h后,用血糖仪连续测3次(隔日测1次)空腹血糖,用毛细血管法判定胰岛素抵抗,其方法为大鼠禁食12 h,将鼠固定于鼠笼中, 腹腔注射胰岛素0.05 U·kg-1。注射前及注射后每3 min 用血糖仪测定血糖,共6 次(加注射前共计7 次)。以血糖浓度为纵坐标,时间为横坐标,直线回归得回归系数r乘以100即KIPT,以平均(1次平均)空腹血糖≥16.7,同时KIPT正常组的60%作为2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠,造模成功56只。 2.2 灌胃罗格列酮lglt 将成模大鼠随机分5组, 为正常组,灌胃纯净水10 mL·kg-1·d-1;模型组12只,灌胃纯净水10 mL·kg-1·d-1;阳性药物组11只,灌胃罗格列酮(LGLT) 1 mg·kg-1·d-1;为荞麦花叶黄酮低、中、高剂量组各11只,分别灌胃FBFL 100,200,400 mg·kg-1·d-1;上述各组大鼠每天上午8点给药1次,同时其他组每天下午2点灌胃脂肪乳1次,连续4周。 2.3 测试指标 2.3.1 游离脂肪酸测定 末次给药后禁食12 h,用血糖仪测定空腹血糖(FBG)、用生化分析仪测定血清游离脂肪酸(FFA);放免法测定血浆胰岛素(INS),以-ln(INS.GBF)表示INS敏感指数(ISI)。 2.3.2 糖的抗剂测量了胰岛素的敏感性 末次给药后大鼠禁食12 h,灌胃20%葡萄糖溶液10 mL·kg-1,分别于0,30,60,120 min测定血糖值。 2.3.3 葡萄糖输注速率 h,腹腔注射水合氯醛300 mg·kg-1麻醉,分离双侧颈静脉,结扎远心端,向近心端插入0.08 cm硅化胶管,结扎固定。从两侧颈静脉同时输注10%葡萄糖和1 U·L-1·min-1胰岛素溶液(恒速),每隔10 min尾静脉取血测血糖值,用恒流泵不断调