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乳酸菌口服疫苗安全性评价 浙江省广泛分布于大自然，在工业、农业、医疗等与人类生活密切相关的重要领域，具有很高的应用价值。和益生作用有关的如乳杆菌属、乳球菌属、肠球菌属和双歧菌属等狭义的乳酸菌尤其受到人们的重视,利用一些乳酸菌在肠胃道、泌尿、生殖系统中或粘膜部位粘附存活且无病原性等特点,开展活菌口服疫苗研究,受到了广泛的重视。乳酸菌活菌携带抗原可以诱导免疫反应已经被证实。 口服疫苗通过胃肠粘膜进行抗原递呈,可经不同的免疫通路产生与常规注射类似的免疫反应。但由于胃肠粘膜对抗原递呈产生免疫的能力弱,口服免疫所需的抗原量很大,使口服免疫的应用受到了限制。随着医学和分子生物学技术的发展,口服疫苗在粘膜抗原递呈方面的研究取得了很大的进步,能有效地诱导机体产生免疫应答和免疫耐受。主要论述了乳酸菌口服疫苗的优点、乳酸菌表达载体以及乳酸菌口服疫苗的发展前景。 1 发展生物人口免疫,扩大生物在体的用量 口服疫苗较之其它途径有一系列的优点。口服疫苗可直接口服,无须静脉注射给药,避免了由于静脉注射而导致感染的危险。口服疫苗配给方便可大范围应用而且相对经济。当疫苗在产业化程度较低的国家中使用时,这个优点特别有意义。另外,对一些病原体进行口服免疫可产生群体免疫,即一小部分个体获得免疫后,免疫可在群体中传播。口服免疫每天产生的抗体超过60%分泌到胃肠道,使许多细菌、病毒、病原体很难经由身体粘膜表面进入身体组织中。口服免疫经常会同时引起局部或系统免疫反应,可以有效地消除病原体。 2 乳酸菌在乳酸杆菌免疫反应中的作用 近年来,疫苗传递系统成为研究传染病防御领域新技术的热点之一。目前研究的载体有微粒载体、细菌载体、病毒载体和植物载体,但主要集中在减毒的病原菌株上。这些系统的一个缺点就是需要通过重组DNA技术或经典的遗传学方法去减弱载体的毒性,这种改变可能会损害它们的免疫原性,而且也带来诸如载体安全性的问题。因此,人们期待找到一种能够在体内较长时间存在,而本身对机体既安全又能产生持续免疫力的传递载体。 乳酸菌长期以来广泛应用于食品发酵和食品保存中,被认为是安全菌,并且一些菌株本身对人类和动物具有促进健康的作用。所以人们开始把目光转向制作乳酸菌口服疫苗上。乳酸菌安全、没有内毒素,表达的外源蛋白无需经过纯化可以直接连通菌体一起服用。另外,其外源基因容量大,刺激细胞免疫力强,并可诱导产生大量的细胞因子,是一种理想的基因工程疫苗载体,特别是针对口服疫苗。再者乳酸菌可以在肠道中存活定植,口服基因工程乳酸菌后,乳酸菌表达的用与治疗或免疫作用的蛋白可以源源不断在肠道中生产并起到相应的作用。不能吸附于肠道的乳酸乳球菌应用于表达破伤风毒素(TT),曾成功引起机体的免疫反应,因此,能在肠道中定殖几天的乳杆菌可能更适合于作为食品级的呈递外源抗原的载体。 乳酸菌表面表达的一些抗原,如肤聚糖层,有天然免疫佐剂的作用,对设计口服疫苗也是很有吸引力的。多个研究表明乳酸菌是良好的载体,可有效地引起机体的免疫应答和免疫耐受。抗原要成功引起免疫反应,必须要有足够的数量,其存在形式能被免疫系统的抗原提呈细胞识别。一般来说,可溶性蛋白的免疫原性口服时较低,但是当它与载体如细菌偶联时就能得到很大的提高,或者可以运用基因工程的手段使细菌产生此种抗原。抗原产生有三种途径:胞内产生、分泌到胞外和展示于菌体表面。 乳酸菌主要是通过小肠上皮微皱褶细胞(M细胞)也可通过鼻腔M细胞,以及上皮下的树状突细胞(DC细胞),激活Th2淋巴细胞,之后激活B细胞,分泌s Ig A(分泌型Ig A)。可见经过口服和鼻腔吸入是乳酸杆菌疫苗的常用接种途径。其进入机体的途径不同产生的免疫反应也有所不同,如表达TTFC的乳酸杆菌经鼻腔接种的Ig G水平要比口服的高100倍,且可同时诱导产生s Ig A反应,其保护能力也好于口服。此外,研究结果也表明,用乳酸杆菌作疫苗,其活菌的免疫效果优于经丝霉素C灭活的细菌,而联合表达一些细胞因子如IL-2、IL-6等可增强其免疫效果。 作为一种原核表达系统,乳酸菌表达系统在表达外源基因上有以下特点:(1)某些菌种本身带有大量的染色体外因子,如质粒和噬菌体,易于发展新的表达载体系统;(2)易培养,遗传操作(如电穿孔法转基因)方法成熟、简便,且效率高,重复性好;(3)本身为食品级细菌,易构建成食品级的基因克隆及表达系统,可以有效提高基因工程产品的安全性,并可在一定程度上简化表达产物的后处理工艺,可大幅度降低生产成本;(4)本底表达水平低,表达量较高,易于纯化;(5)具有强烈的高度可调控的启动子系统,可表达毒素基因;(6)可在细胞内表达也可在细胞表面表达并分泌到胞外培养基中,利用乳酸菌表面展示系统表达抗原,多肽抗原暴露于细胞表面更易被免疫系统识别;(7)乳酸菌的某些菌株如乳杆菌可定植肠道,能有效引起机体的免