长竹精原细胞发育过程中超微结构的变化.docxVIP

长竹精原细胞发育过程中超微结构的变化 动物的精子发生是寄生虫学的一个重要问题之一。精子的形态结构不仅是分类的依据之一，也是分析不同动物群体之间的亲和力的重要依据。有关双壳类软体动物精子超微结构及精子发生的研究国内外已有大量报道。长竹蛏Solen strictus属于双壳纲(Bivalvia)帘蛤目(Veneroida)竹蛏科(Solenidae)竹蛏属(Solen),为我国沿海潮间带最常见的一种贝类,在食用贝类中占有重要的地位,是一种很有发展前途的养殖种类。迄今为止,有关学者对长竹蛏的繁殖和育苗技术等进行了一些研究,但国内外尚未见到有关长竹蛏精子发生和精子超微结构研究的报道。本文观察长竹蛏精子发生的演变规律和精子超微结构的特点,以期为长竹蛏生殖生物学的研究及人工育苗的开展提供理论依据。 1 重组样品的制备 试验材料:性腺已成熟的雄性长竹蛏个体6个,壳长约为6.5—7.5cm。2002年10月、12月和2003年3月取自福州市程埔市场。 实验方法:将活体长竹蛏迅速解剖,取出精巢切成约1.5mm3的组织块,加入3%戊二醛/1.5%多聚甲醛前固定,4℃保存备用。1%锇酸/1.5%亚铁氰化钾后固定1.5h,PBS漂洗;70%酒精饱和醋酸铀染液块染,酒精/丙酮梯度脱水,环氧树脂618包埋剂包埋。瑞典LKB-V超薄切片机切片,切片厚80nm,醋酸铀、柠檬酸铅各染色5min;JEOL、JEM-1200EX透射电镜下观察与摄影。 2 发生不同步的情况 长竹蛏的精巢由许多滤泡型腺体组成,精子的发生是不同步的。生殖上皮向管腔中央排列着一群不同发育阶段的生精细胞:精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞和精子。 2.1 高尔基体计划m-3. 精原细胞数目较少,在生精细胞中个体最大,形状为长椭圆形,大小为(9.0—10.5)μm×(5.0—6.5)μm。细胞核大,呈椭圆形,大小为(6.0—6.5)μm×(3.6—4.5)μm。异染色质少,呈小块状在核质中稀疏分布。细胞质电子密度低,含有一些椭圆形的线粒体(mitochondria)。线粒体基质电子密度低、嵴稀少,看起来似空泡。内质网(rough endoplasmic reticula)呈条索状,但未见高尔基体等细胞器(图1-1)。早期精原细胞经一次有丝分裂形成晚期精原细胞,其明显变化是异染色质块稍变大,线粒体嵴增多增长,同时细胞质中可见轴丝(axial fiber)(图1-2)。 2.2 核型细胞核的电子密度 初级精母细胞由晚期精原细胞转化而来。细胞近椭圆形,大小约为7.5μm×4.5μm。细胞核呈卵圆形,长径约5.5μm,短径约3.2μm。核内异染色质块增大,附在核内膜及不均匀分散在核质中。胞质电子密度增高。椭圆形线粒体多分布在细胞的一侧,已开始具有极性。线粒体体积稍增大,基质电子密度增高。内质网更加发达(图1-3)。 2.3 高电子质细粒形貌 初级精母细胞经第一次成熟分裂产生次级精母细胞,这时期常见核分裂为二而胞质未分开的现象,形成双核细胞(binucleate phase)。细胞椭圆形,长径为6.0—6.5μm,短径为4.0—4.5μm(图1-5)。细胞核也呈椭圆形,大小为(4.0—5.0)μm×(2.6—3.0)μm。细颗粒状异染色质凝聚成大的团块,有的团块已互相融合在一起。线粒体集中在细胞的一侧,极性分布更加明显,嵴更多更长。内质网发达,成长条索状。同时,细胞质可见一些高电子密度的前顶体颗粒(proacrosomal granule)(图1-4)。高尔基体(Golgi bodies)发育较好,它由一系列致密平行的扁平囊组成,两端膨大成泡状,其周围分泌有嗜锇的高尔基囊泡(Golgi vesicle)(图1-6)。 2.4 前后前积体积 精细胞是次级精母细胞经第二次成熟分裂产生的,前者体积明显比后者小。根据其发育过程中异染色质凝集状况、前顶体囊和线粒体形态及位置的变化,可分为4个时期。 2.4.1 高电子密度的前顶体囊 细胞椭圆形,大小为(3.0—3.8)μm×(2.0—2.5)μm。细胞核较大,核形与胞体一致,大小约为2.5μm×1.8μm。颗粒状异染色质变粗且团块大部分已连合在一起。线粒体数目减少,体积显著增大,嵴更加发达。内质网逐渐减少。可见发达的高尔基体及分泌的囊泡(图1-7)。同时,细胞质有大量高电子密度的前顶体颗粒,这些前顶体颗粒逐渐融合形成椭圆形的前顶体囊(proacrosomal vesicle)。 图1-8示前顶体颗粒正融合进入前顶体囊,前顶体囊内含有电子密度中等的絮状物质。此时前顶体囊与线粒体共同分布于细胞的一端。 2.4.2 中心体及前顶体囊的迁移方向 细胞呈椭圆形。核逐渐变为近圆形,长径约为2.1μm,短径约为1.8μm。核内颗粒状染色质变粗。线粒体基质的电子密度