基于液相色谱-电喷雾质谱技术的北五味子与南五味子木脂素成分研究.docxVIP

基于液相色谱-电喷雾质谱技术的北五味子与南五味子木脂素成分研究 木兰科植物的五味子（turcz.）的干燥成熟果实被称为“北五味子”，具有收敛、收敛、益气、饱满、补肾、安神的功效。木兰科植物的华子街已经成熟了。它的味道与北方相似。除了北五味子中的三种环己烯酸木脂素外，南五味子还含有二芳基吡啶、二芳基巴比妥和四羟基丁基酯的成分。现代研究表明，北五味子的药值大于南五味子。然而，由于它们的形状相似，许多功能主义者的处理相同，而南五味子的价格通常低于北五味子。因此，一种简单、快速、有效的方法对于识别和区分相似的中药具有重要意义。另一方面，它不会造成不必要的经济损失，同时，确保材料的安全有效。 南五味子、北五味子常用的鉴别方法主要是性状、显微鉴别,薄层色谱和液相色谱等方法.液相色谱-电喷雾质谱联用技术(HPLC-ESI-MSn)是近年发展起来的天然产物有效成分定性定量分析工具[7~14].本实验采用HPLC-ESI-MSn方法,在正、负离子模式下,利用木脂素类成分ESI-MSn行为的异同,对南、北五味子的木脂素类成分进行了比较研究,建立了南、北五味子快速、准确、有效的鉴别方法. 1 实验部分 1.1 南药、北药、南药 甲醇色谱纯试剂(美国Fisher公司);提取用甲醇为分析纯(北京化工厂).水为超纯水(18.2 M?·cm).北五味子、南五味子药材购于宏检药材公司;五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素对照品购于中国药品生物制品鉴定所. 1.2 药物中药物对照品溶液的制备. 分别精确称取南五味子、北五味子药材粉末(过三号筛)0.5703 g和0.5637 g,置50 m L容量瓶中,加甲醇约48 m L,超声提取30 min,取出冷却至室温,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,续滤液0.45μm滤膜滤过,即得.分别精确称取五味子醇甲(Schisandrin)、五味子酯甲(Schisantherin A)、五味子甲素(Deoxyschisandrin)、五味子乙素(Schisandrin B)对照品2 mg,定容至2 m L容量瓶中,得1 mg/m L对照品溶液备用. 1.3 电喷雾质谱分析条件 2690HPLC-DAD型高效液相色谱仪(Waters Co.,Milford,MA,USA),检测条件:Dikma Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);柱温35℃;二元线性梯度洗脱:流动相:(A)水;(B)甲醇.流动相梯度组成:0~45min 75%~100%流动相B;45~60 min 100%流动相B.流速0.5 m L/min;检测波长:254 nm;样品进样量10μL. 电喷雾质谱分析条件:LCQTM电喷雾离子阱质谱仪(Finnigan,USA);采用正、负离子模式,扫描范围:m/z50~1000.离子阱的条件:喷雾电压4.0 k V,壳气(N2)60 units、辅助气(N2)10 units,金属加热毛细管温度200℃,毛细管电压16 V. 2 木脂素对照品的hplc-ms分析 南五味子、北五味子中几种主要类型的木脂素类化合物的结构示于表1.4种木脂素对照品的HPLC谱图如图1(a)所示.4种木脂素对照品的ESI-MSn谱图如图2所示.五味子中4种木脂素成分的ESI-MSn谱图如图3所示. 2.1 化合物结构鉴定 北五味子的HPLC谱图如图1(b)所示,主要木脂素类成分的保留时间(tR)、紫外最大吸收波长λmax、质谱正、负离子模式下分子离子以及ESI-MSn实验产生的主要碎片离子如表2所示,将主要成分的色谱行为、结构信息与对照品及相关文献对照鉴定了13个成分(表2). 对照品Schisandrin的液相色谱保留时间在13.3min,HPLC-ESI-MS一级谱中的准分子离子为[M+H]+(m/z 433)和失水峰[M+H-H2O]+(m/z 415),表明Schisandrin的C-7位羟基易失去而产生失水的碎片离子.[M+H-H2O]+离子在ESI-MSn条件下发生碎裂产生一系列碎片离子[图2(a)],m/z 384,400是m/z 415离子分别失去C-14位上的甲氧基和甲基产生的.因为此类联苯环辛烯木脂素的苯环周围有很多甲氧基取代基,所以准分子离子经碰撞诱导解离,中性丢失甲基和甲氧基是较主要的裂解途径,由于空间位阻效应的影响,C-14或C-1位上的甲氧基更容易发生断裂,而形成稳定的产物离子.m/z 373,359是联苯环断裂失去C3H6和C4H8碎片产生的.液相色谱保留时间在13.3 min的化合物,在ESI-MSn条件下产生的碎片离子与Schisandrin相同(表1),因此确定该化合物为Schisandrin.液相色谱保留时间在17.7 min的化合物,在HPLC-ESI-MS一级谱中的