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顶空固相微萃取-气相色谱-质谱法分离鉴定白术中挥发性成分 中药白术是蔷薇科植物白术的干燥根茎。具有健脾益气、除湿利尿、止汗安胎的功效。挥发油是白术的主要活性成分,现代药理研究表明,白术挥发油具有利尿、降血糖、扩张血管、抑菌、抗炎、抗肿瘤等多方面的生理活性。过去一般采用水蒸气蒸馏法(SD)提取白术中的挥发油成分。水蒸气蒸馏法是从芳香植物中获得挥发油的最常用的提取技术,然而,水蒸气蒸馏易导致挥发性化合物的损失,萃取效率低,萃取时间长,且高温和水也可能使挥发性组分降解和产生化学变化。固相微萃取是一种简单快速的提取技术, 已用于蔬菜、水果、果汁、中药和酒类等样品中挥发性成分的提取,为不同样品中的挥发性成分提供了与水蒸气蒸馏法同样有效的提取方法。 采用顶空-固相微萃取法(HS-SPME)提取白术中的挥发油成分还未见报道。本文采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术对白术中的挥发性成分进行分析,考察了SPME的操作参数(纤维头、样品平衡时间、萃取温度、萃取时间和解吸时间),并将分析结果与采用SD-GC-MS所得的结果进行了比较。结果表明,HS-SPME-GC-MS方法作为一种简单快速便利的手段非常适合用于白术中挥发性物质的提取和分析。 1 实验部分 1.1 聚二甲基硅氧烷-二乙烯基苯萃取头的合成 日本岛津QP2010 GC-MS仪;SPME萃取手柄及聚二甲基硅氧烷(PDMS,100 μm)、聚二甲基硅氧烷-二乙烯基苯(PDMS-DVB,65 μm)和高度交联聚乙二醇-二乙烯基苯(CW-DVB,65 μm) 萃取头(美国Supelco公司)。水蒸气蒸馏装置,恒温水浴池及真空浓缩装置。白术购于长沙市老百姓大药房,正己烷为分析纯。 1.2 粗粉的制备 将白术首先在40 ℃下恒温干燥1 h,粉碎后过20目筛,得粗粉备用。取100 g白术粗粉用挥发油提取器按常规水蒸气蒸馏法提取挥发油5 h,减压浓缩,经无水硫酸钠干燥后得挥发油。 1.3 固相微萃取装置解吸回用 取0.5 g粗粉置于10 mL配有聚四氟乙烯胶垫的小瓶中,在70 ℃下平衡30 min,将固相微萃取装置穿过隔膜插入密封瓶中,推出萃取头顶空萃取30 min,之后将固相微萃取装置迅速插入GC进样器中,在250 ℃不分流模式下解吸4 min。在取样前,应将萃取头置于GC进样器中于250 ℃下活化5 min。 1.4 样品预处理和测定 色谱条件:OV-1毛细管柱(30 m×0.25 mm,膜厚度0.25 μm);载气为He气,流速0.9 mL/min;SPME得到的样品采用无分流进样;水蒸气蒸馏提取样品采用分流进样,分流比为1∶10。初始柱温60 ℃(保持2 min),以4 ℃/min的速率升温至250 ℃,保持5 min。总测定时间52.5 min。 质谱条件:电子轰击离子源(EI),接口温度250 ℃,离子源温度200 ℃,检测电压0.8 kV,电子能量70 eV,固相微萃取的解吸时间为4 min,溶剂延迟时间为4.5 min。 1.5 定性和半定量分析 采用NIST147质谱数据库检索进行定性分析,单个化合物的相对含量用其峰面积相对总峰面积的百分比来表示。 2 结果与讨论 2.1 萃取条件优化 2.1.1 萃取头的选择 在萃取温度70 ℃,样品平衡时间和萃取时间均为30 min 的条件下,考察3种萃取头的萃取能力。选取白术中的10个组分,它们分别为香附烯、 石竹烯、γ-榄香烯、α-石竹烯、 4(14),11-桉叶二烯、 香橙烯、 绿叶烯、 苍术酮、α-红没药醇和4-苯乙基哒嗪。比较3种萃取头萃取该10种组分所得的色谱峰面积,结果见图1。可以看出,PDMS对保留时间较短的非极性或弱极性化合物的萃取能力较强,而CW-DVB对极性化合物表现出较强的萃取能力,PDMS-DVB则对两类组分都有萃取;采用PDMS-DVB 萃取头既能分析到白术中单萜和倍半萜烯成分,也能分析到其中的醇醛类等极性较大的物质;且PDMS-DVB萃取头的萃取量综合起来更高些。因此本文选用PDMS-DVB萃取头。 2.1.2 spme萃取时间和解吸时间的优化 改变萃取条件会较大地影响峰面积值,但色谱峰的数目不受影响,故本文以色谱峰面积总和作为参数来优化各SPME操作条件。图2为其他条件不变时,不同萃取温度下萃取时间与总峰面积的关系曲线。结果表明,萃取时间越长,总峰面积越大,萃取时间达到30 min后总峰面积基本不变。试样的温度增高能增加顶空芳香化合物的浓度,有利于它们的萃取。然而,SPME 是一个放热过程,当温度高到一定程度后,化合物的萃取量反而减少。萃取温度在80 ℃左右时总峰面积最大,但考虑到温度太高,某些组分在后续的分析中重叠更为严重,不利于样品的定性分析,所以本文中采用萃取温度为70 ℃。 保持其他条件不变,将样品平衡