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植物激素-乙烯的信号转导机制 原油是一种非常简单的气体植物激素，在植物发育和适应性反应中起着非常重要的作用。种子萌发、开花、叶片衰老、果实成熟、叶片剪切、根瘤、细胞程序性死亡以及对非生物胁迫和病原体入侵的反应等生理过程都与乙烯密切相关。鉴定乙烯反应的特征性实验是观察生长在暗处并经乙烯处理之后植物黄化苗的“三重反应”。所谓“三重反应”是指黄化苗受乙烯处理后下胚轴和根的伸长被抑制、下胚轴变粗以及顶端弯钩加剧(图1)。科学家通过基于“三重反应”进行遗传筛选的方法,在过去的近20年中找到一系列拟南芥的乙烯突变体(图2)。这些突变体可以被分为3种类型:(1)乙烯过表达突变体,如eto1,eto2,eto3;(2)组成型乙烯反应突变体,如ctr1;(3)乙烯不敏感突变体,如etr1,etr2,ein2,ein3,ein4,ein5以及ein6。通过对这些拟南芥突变体的深入研究,科学家逐渐描绘出一条近似线性的乙烯信号转导通路(图3)。首先,在上游对乙烯分子的感知是通过一个与内质网膜相结合的受体家族来完成的,其中包括ETR1,ETR2,ERS1,ERS2,EIN4。这些乙烯受体在序列上具有相似性,并且在结构上都与细菌双组分组蛋白激酶相类似。与乙烯受体相结合并协同抑制下游乙烯信号的是一个属于Raf蛋白激酶家族的负调节因子CTR1蛋白。遗传上位于CTR1下游的正调控因子EIN2是一个定位于内质网膜上的大的跨膜蛋白。EIN2的N端与哺乳动物金属离子通道蛋白NRAMP家族有一定的相似性;而其C末端是一个亲水的功能未知的组分。研究发现,EIN2的C末端与已知蛋白没有任何同源性,但是如果在拟南芥中单独转基因表达该区段却足以组成型地激活乙烯和胁迫反应。表型、遗传以及生化的分析结果都显示EIN2蛋白位于乙烯信号通路的一个中心位置。EIN2作为一个正调控因子,其抑制被解除后即可通过正调乙烯信号途径的主要转录因子EIN3和EIL1而将信号通过转录级联方式传递下去,使得下游乙烯应答基因的转录被活化而产生乙烯反应。近年来,一些新的科研成果进一步丰富和扩展了乙烯的线性信号转导通路。研究表明,铜离子作为一个辅助因子促进乙烯与受体的结合,而铜离子的转运和浓度梯度的维持对于乙烯与受体的结合是一个必要的过程。一种具有铜离子转运功能的P-type ATPase RAN1在乙烯受体的生物发生以及铜离子的稳态平衡过程中起到重要的调节作用。RTE1是另一类对受体功能起调节作用的乙烯信号的负调控蛋白,它与乙烯受体共定位于内质网膜上并在遗传上位于ETR1的上游,主要通过调节ETR1的活性来调节乙烯反应。研究表明,EIN3蛋白可被两个F-box蛋白EBF1和EBF2识别结合并进入泛素化降解过程。有趣的是,研究表明EIN2同样是一个半衰期很短的会被泛素化降解的蛋白,识别和降解EIN2蛋白的F-box蛋白是ETP1和ETP2。5’→3’外切核酸酶EIN5/XRN4蛋白能够通过降解EBF1和EBF2的mR-NA来拮抗EBF1和EBF2对EIN3的负反馈调控。近期,关于EIN3蛋白磷酸化修饰调节的研究揭示出更为复杂的激素调控网络的存在。 1 乙烯受体的结构 植物细胞通过定位于内质网上的受体感知乙烯信号。在拟南芥中共有由一个多基因家族编码的5个乙烯受体,分别是ETR1,ETR2,ERS1,ERS2和EIN4。它们在结构上类似于细菌和真菌中存在的双组分组蛋白激酶。通过比较其结构特征,发现乙烯受体存在至少3类保守的结构域:N端是一个在铜离子协助下与乙烯结合的跨膜结构域;中间是一个负责不同受体间相互作用的GAF结构域;C端是一个能与下游组分CTR1相互作用的激酶结构域。乙烯5个受体可根据其结构相似性被分为两大类,一类受体包括ETR1和ERS1,另一类受体包括ETR2,ERS2和EIN4。研究表明,乙烯受体的N端涉及受体的膜定位、乙烯结合以及受体的二聚化等基本功能,因此5个乙烯受体在N端具有较高的相似性。乙烯受体的C端则是类似于组蛋白激酶的结构域。但是,体外激酶活性实验表明仅有ETR1,ERS1具有组蛋白激酶活性;其他受体ETR2,ERS2和EIN4则由于缺少组蛋白激酶活性所必需的氨基酸残基而可能作为丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶来起作用。 由于乙烯结合能力发生突变而产生的受体功能获得型突变体将会导致组成型乙烯不敏感表型的出现,表明乙烯受体作为乙烯信号的负调控因子而存在。同时,乙烯的5个受体存在功能上的冗余,因为单个受体的功能缺失型突变体表型与野生型类似,但多重功能缺失突变体则具有组成型的乙烯反应表型。进一步研究发现,转基因表达类型Ⅰ受体ETR1或ERS1能够回复功能缺失型双突变体etr1/ers1的组成型乙烯反应表型;转基因表达类型Ⅱ受体ETR2,ERS2或EIN4却不能回复etr1/ers1双突变体的组成型乙