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浅析斑马鱼的遗传毒性 又名红麦鱼、花麦鱼和红麦尼鱼。它是属于印度和孟加拉国的一种亚热带观赏植物。斑马鱼成鱼体型较小, 体长4~6厘米, 胚胎透明且体外发育, 易于活体观察;生长发育快, 受精后2 4小时主要器官原基基本形成, 便于研究组织器官的发育和功能;2~3个月可长成成鱼, 繁殖能力强且易于饲养, 雌鱼每周可产卵200~300枚, 可快速获得大量胚胎。斑马鱼的特点使其在20世纪70年代开始受到科学家们的关注, 并成为最重要的模式脊椎动物之一。随着斑马鱼基因组测序工程的完成, 发现斑马鱼的基因与人类的基因保守度达到8 5%, 使得斑马鱼成为一种研究人类疾病的模式动物越来越受到人们的关注。同时, 斑马鱼胚胎发育遗传学技术的逐步建立和完善也为斑马鱼的人类疾病模型的建立和分析提供了良好的基础。本文就斑马鱼在人类疾病研究中的应用作一综述。 1. 基于同源基因突变的疾病模型 斑马鱼作为人类疾病模式动物的研究, 主要从建立疾病模型和利用疾病模型进行机制研究、药物筛选等几个方面进行。建立疾病模型常用的方法是正向遗传法和反向遗传法。反向遗传法是从基因入手, 研究斑马鱼体内与人类疾病相关基因的同源基因, 通过显微注射反义探针等方法诱变该基因, 并研究其突变体表型与人类疾病症状的相似性。而正向遗传法则开始于表型筛选, 通过非特异性诱变的方法得到大量的突变体, 研究出现特定表型的突变基因, 分析该基因的序列、蛋白产物及其功能。同时寻找人类相应基因, 借此发现与疾病相关的人类基因或与疾病对应的基因缺陷。在人类和斑马鱼中高度保守的同源基因突变后若导致生物体出现相似表型, 则可将该基因的突变体纳入研究相应人类疾病模型的范围内。已建立的疾病模型则可用于研究该疾病发生的原因和发现可能出现的并发症。同时, 利用组织被特异性标记的转基因斑马鱼筛选影响其组织器官发育的外源性物质也是近年逐渐升温的研究方向。 2. 本马登鱼在人类疾病模型中的应用 2.1 斑马鱼与鱼类正常鱼杂交产生的肿瘤的治疗 斑马鱼能像人类一样患癌症且具有稳定遗传性, 遗传背景相对简单, 其体内的致癌基因、肿瘤抑制子等与肿瘤相关基因也与人类有高度的保守性。通过诱变基因或细胞移植的方法可使斑马鱼体内产生或移入具有高度转移性的肿瘤细胞, 并使斑马鱼罹患癌症, 且患有癌症的斑马鱼与同类正常鱼杂交产生的后代也具有癌症的表型。目前, 已经建立了白血病、黑色素瘤、横纹肌肉瘤, 淋巴肉瘤, 肝癌, 乳腺癌等疾病的斑马鱼模型, 斑马鱼体内和人体内的肿瘤在组织学上的相似性使得这些肿瘤模型在其相应人类疾病的研究中有着重要的意义。热击处理成鱼的特定组织、细胞诱发肿瘤的方法和斑马鱼组织特异性标记荧光技术的逐步完善为建立和研究某些特定种类肿瘤的斑马鱼模型提供了良好的技术支持。 除了建立实体瘤斑马鱼模型, 利用斑马鱼研究肿瘤的血管生成也是倍受关注的研究方向, 原位杂交技术和微血管造影技术等方法的建立将该研究方向引入了一个更加成熟的发展阶段。运用血管被特异性标记荧光蛋白的斑马鱼胚胎大规模筛选抑制节间血管或改变其形态的小分子的研究已初见成效, 经研究发现:免疫抑制剂麦考酚酸剂量依赖性抑制flk-GFP转基因斑马鱼节间血管的生长。 2.2 突变体的肌肉张力 斑马鱼的肌肉结构和发育过程与人类相似, 且其体内存在许多与人类肌肉相关的基因并具有高度的保守性。斑马鱼的一些抗肌萎缩蛋白基因及其蛋白产物都与人类有高度的相似性, 体现了其肌肉组织结构可能具有功能保守性, 也将研究者的目光聚焦到利用斑马鱼体内的基因和蛋白研究肌肉萎缩症的领域中。 Hirata等进行表型筛选时发现突变体accordion的肌肉松弛紊乱, 并找到了肌肉功能缺陷的原因:SERCA1突变, 在进一步研究中发现人类Brody疾病和突变体accordion之间具有相似表型且其对应基因的突变也非常相似, 利用accordion突变体建立Brody疾病斑马鱼模型指日可待。 同样引起研究者注意的还有突变体sapje, 该突变体体内的D M D基因断裂, 而其同源基因在人体内突变会导致因该基因编码的抗肌萎缩蛋白减少而造成的迪谢内肌营养不良症, 这一发现有利于进一步了解人类迪谢内肌营养不良症的病因及症状, 并利用该突变体建立研究模型。 2.3 髓剑轴突产生神经疾病的关系 斑马鱼在神经系统发育及功能疾病的研究中的广泛应用源于其与人类非常相似的神经系统, 许多人类神经系统疾病相关的基因都在斑马鱼中高度保守。研究人员在斑马鱼体内发现了与神经嵴疾病相关的P h o x 2 b基因和对帕金森疾病有影响的U C H-L 1基因, 且与其人类同源基因具有高度保守性, 该发现为神经嵴疾病和帕金森疾病的研究开辟了新的途径。 髓鞘轴突在神经冲动传导中有着重要的作用, 异常发育的髓鞘轴突会引起一系列的神经