快速测定莪术油脂质体包封率的方法研究.docxVIP

快速测定莪术油脂质体包封率的方法研究 莪术油是通过蒸汽蒸馏获得的蒸发过程。它的主要成分是半人三醇，包括莪术醇、莪术酮、莪术双酮和谷仓醇20多种化学成分。其中，糊精醇是最高的化学成分。现代研究证明, 莪术油具有广谱的抗肿瘤和抗病毒活性等多种药理活性及广泛的临床应用。目前临床上使用的莪术油剂型一般包括注射液、乳剂、乳膏剂、栓剂, 但这几类剂型远不能满足临床用药需求, 也不能充分发挥其疗效。近年来, 研究莪术油新剂型已成为新的研究热点, 很多新技术和新剂型已不断涌现, 这些制剂目的在于改善莪术油的靶向作用, 使其更广泛地应用于癌症治疗, 其中包括莪术油纳米粒, 微球与微囊。ZTO-L是其中一种莪术油新剂型, 目前已有大量的报道[5~8]。包封率是脂质体制备工艺研究的重要质量控制指标之一。脂质体包封率的测定方法以葡聚糖凝胶柱层析法和透析法为主[6~9], 但实验表明, 常用的包封率测定方法并不适合所有性状的ZTO-L。本实验考察了石油醚萃取法分离ZTO-L和游离药物的回收率, 建立了萃取-显色法测定ZTO-L包封率的分析方法, 并与其他常用包封率测定方法进行比较。 1 试剂与标准品 紫外分光光度计 (UV-2100, 尤尼科) , 数控超声波清洗器 (KQ5200 DE, 昆山市超声仪器有限公司) , 高速匀浆机 (A200-18G, 上海光学仪器六厂) , 电子分析天平 (BS110S, SARTORIUS) , 恒温加热磁力搅拌器 (RCT basic, IKA) , 高速冷冻离心机, 高纯蛋黄卵磷脂 (PC-98T, 注射级, 上海艾韦特) , 高纯胆固醇 (CHO-HP, 注射级, 上海艾韦特) , 三油酸甘油酯 (60%阿拉丁) , 莪术油 (国药准字 达州市天然植物药业有限公司) , 莪术醇标准品 (HPLC≥98%, 北京上立方化工技术公司) , 吐温80 (AR, 天津大茂) , 微孔滤膜 (0.45, 0.22μm, 津腾) , 香草醛 (AR, 北京化学试剂有限公司) , 葡聚糖凝胶 (Sephadex G-50, 上海华蓝化学科技有限公司) , Triton X-100 (MYM Biological Technology Company limited) , 透析带 (8000-15000, USA) 。 2 方法和结果 2.1 微生物滤膜的制备 取处方量的磷脂、胆固醇、三油酸甘油酯, ZTO溶解于3ml乙醚中, 将2.5ml的PBS (p H 6.5) 缓慢地注入上述乙醚混合物中, 同时超声处理, 注入完毕继续超声15min形成初乳。将上述初乳缓慢地注入7.5ml含有吐温80的PBS中, 同时均质处理, 注入完毕继续均质20min, 挥发除去乙醚, 分别过0.45μm及0.22μm微孔滤膜各3次, 即得。空白脂质体在制备过程中不加入ZTO。 2.2 供试品溶液及标准品溶液的制备 2.2.1 显色剂配制:称取香草醛0.2g, 加1ml无水乙醇溶解, 加入硫酸溶液 (1→2) 100ml中, 混匀即得, 临用新制。 2.2.2 供试品溶液的制备:精密移取0.5ml ZTO-L, 加入2ml PBS (p H 6.5) 稀释, 即得ZTO-L稀释液。精密移取ZTO-L稀释液1ml于10ml容量瓶, 加入1.5ml 5%Triton X-100振摇破乳, 无水乙醇定容即得ZTO-L供试品溶液;精密移取ZTO-L供试品溶液1ml, 用显色剂定容于10ml容量瓶, 于20℃~25℃放置1h, 即得ZTO-L待测供试品溶液。 精密称取ZTO 5.34mg, 无水乙醇定容于125ml容量瓶, 即得浓度为43.2μg·ml-1的ZTO供试品溶液;精密移取ZTO供试品溶液1ml, 用显色剂定容于10ml容量瓶, 于20℃~25℃放置1h, 即得浓度为4.32μg·ml-1的ZTO待测供试品溶液。 2.2.3 标准品溶液的制备:精密称取莪术醇标准品5mg, 无水乙醇定容于5ml容量瓶, 制备成1g·L-1的莪术醇标准溶液。 2.2.4 空白溶液的制备:空白脂质体按照ZTO-L供试品溶液的方法制备, 即得脂质体空白溶液;精密移取脂质体空白溶液1ml, 用显色剂定容于10ml容量瓶, 于20℃~25℃放置1h, 即得待测脂质体空白溶液。精密移取1ml无水乙醇, 用显色剂定容于10ml容量瓶, 作为乙醇空白溶液。 2.3 波长扫描测定空白 精密移取上述莪术醇标准溶液0.4ml, 用无水乙醇稀释10倍, 精密移取稀释液1ml, 用显色剂定容于10ml容量瓶, 于20℃~25℃放置1h, 乙醇空白溶液作为空白, 在430~700nm进行波长扫描。结果如图1所示, 莪术醇显色后在520nm处有最大吸收。 2.4 标准溶液