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运行过程中生物滤器异养细菌动态及熟化作用

由于水产养殖废水引起的环境问题引起了国内外学者的关注。生物膜法已应用于水产养殖系统的废水处理。生物膜的性能因生物滤器使用载体的不同而异,对于不同的载体,附着微生物的数量和种类也会有差异。Leonard等对循环养殖试验系统中异养细菌种群进行了研究。Tal等对封闭循环海水养殖系统中移动床生物反应器的微生物群落特征和氮转化过程进行了调查。笔者对淹没式生物滤器中两种载体生物膜形成过程中异养细菌数量动态及熟化后细菌的氨化作用进行了分析。

1材料和方法

1.1设置粗管和细管之间的载体

选取2个规格为60cm×20cm×45cm的水族箱,盛水40L。每个水族箱内安装淹没式生物滤膜器2个,该滤器由粗细2个聚乙烯塑料管组成,粗管(净化柱)直径5.9cm,细管直径3cm。净化柱内装载体,距柱底3cm处另置一筛绢网托住,柱底部周围锯成齿状,以保证水流的畅通均匀。细管要固定在净化柱上,顶部连一个三通管,管内放有气石,以气体为动力使水流循环。水族箱内也放有气石,兼充气和混合水双重作用,调整细管中气石高度,使水流从吸管顶端流经载体,以保证水流循环不断。本装置从4月16日开始运行,用加热棒加热,水温控制在(21±2)℃。

1.2沙滤海水的制备

菌种取自盘锦河蟹池底泥,经过富集培养的氨化菌、亚硝化菌、硝化菌群。

载体使用两种:一种是天然沸石,直径1cm左右的小石块,放入由筛绢网缝制的长方形口袋中,分上、下两层装入净化柱中,中间不留空隙,装入筛绢网中,每一个装置装两包。另一种是无纺布,将无纺布剪成宽15cm、长60cm的长条共4条,使用前先在海水中浸泡48h,经反复冲洗后各自卷成一卷,分上、下两层放入净化柱中,每个装置中分上、下两层各装一卷。

试验用水为大连市黑石礁海滨的沙滤海水,盐度30,pH8.0～8.1。

试验用药为蛋白胨、烯丙基硫脲(ATU)、Tween、NH4Cl、K2HPO4、NaNO2等。

1.3测试方法

1.3.1硝化菌富集法

在每个水族箱中分别接种500mL氨化菌、亚硝化菌、硝化菌富集培养液,加入36mg/L蛋白胨和30mg/L氯化铵。温度控制在(21±2)℃,每隔3d测定水族箱中水的总氨氮(TAN)和亚硝酸氮含量。

1.3.2异养细菌数量测定

在生物滤器运行生物膜成熟过程中,每隔一定时间取载体约10g,加入10mg/L磷酸缓冲溶液和体积分数为0.1%的无菌Tween溶液,震荡30min后进行异养细菌数量测定(PC法),使用2216E培养基,培养温度为(21±2)℃,7d后计数。

生物膜成熟后,取载体于体积分数为3%的戊二醛(用0.1mol/L磷酸缓冲液配制)中固定2h,用0.1mol/LP.B.S清洗3次,每次10min。用叔丁醇上行系列脱水、干燥、粘台,然后用JEC-1100型离子溅射仪镀膜,JEM-1200EX型透射型电镜(带扫描附件)观察、拍照。

1.3.3生物膜的氨化速率

本试验条件下,生物滤器运行37d(至5月23日)后生物膜成熟(水中氨氮和亚硝酸氮含量均降至1mg/L以下)。生物膜成熟后换水,并向各水族箱中加入ATU(最终质量浓度为10mg/L),以阻断亚硝化作用,1.5h后,加入36mg/L蛋白胨。混匀后立即测其初始的TAN的浓度(mg/L),8h和24h后再各测1次。以水中总氨氮的增加量来计算氨化速率。

载体生物膜的氨化速率计算公式

a1=△C·V1/(V2·t),a2=△C·V1/(W·t),

其中:a1和a2为载体的氨化速率[μg/(cm3·h)、μg/(g·h),以N计,载体以表观体积和湿重计];△C为水中TAN的初始和最终浓度差(mg/L);V1为水族箱中水的体积(L),V2为载体的表观体积(cm3)(V2=π·r2·h,r为净化柱的半径,h为净化柱中载体的高度);W为载体及其生物膜的质量(湿重g);t为作用时间(h)。

2结果与讨论

2.1细菌数量变化

本试验在(21±2)℃条件下,生物膜熟化时间为37d左右,而相同的滤器在温度28℃左右,生物膜的熟化时间为19d左右,可见较高温度(28℃)更有利于生物膜成熟,因为硝化细菌的适宜

生长繁殖温度是25～35℃。

生物滤器运行过程中,异养细菌数量测定结果见表1。可以看出,沸石和无纺布两种载体生物膜中细菌数量变化趋势类似,即生物滤器运行前期异养细菌数量高(107～108CFU/g),随着时间的推移逐渐减少(105～106CFU/g)。这表明随着生物滤器的运行,投放的蛋白胨等有机物大部分被天然沸石和无纺布上的生物膜中的异养细菌氧化分解,产生的无机物使硝化

细菌开始繁殖并发挥作用,随着有机物的减少,异养细菌数量也相应减少。

生物膜成熟后,载体生