神经细胞电生理检测技术的应用.docxVIP

神经细胞电生理检测技术的应用

神经系统对生物体内外环境的输入和输出信息由金元动作电位（ap）传输。神经电生理活动是神经细胞传递信息的主要方式,其波形、幅度、频率不仅表达了单个神经细胞本身的生理状态,还携带了细胞群体之间沟通交互的相关信息。神经细胞电生理技术是对群体神经细胞的电生理活动进行高精度、高通量、实时性检测的技术,通过该技术可获得神经细胞状态、功能及相互作用的机制,还可探索神经元的反应性和神经元对信息的调节机制。神经细胞电生理技术主要包括:膜片钳技术(patchclamprecordingtechnique,PCRT)和在体多通道微电极阵列神经信号技术(Invivomulti-channelmicroelectrodearrayforneuralsignalrecordingtechnique,M-NEMEA)。这两种技术都可以对神经元群体开展全面、准确、实时、同步的电生理信号检测,从而为进一步揭示神经信号的传递、编码与解码的本质提供了技术上的支持。但两种技术各有自身的技术特点和使用范围。膜片钳技术对测试电极要求高,不利于长时间连续记录;而在体多通道微电极阵列神经信号技术是采用细胞外记录的方法来检测神经元群的同步电活动,可长期无损检测细胞电生理活动,并通过高通量通道,把具有电活性细胞构成的神经网络中获得的数据传输出来。目前,神经细胞电生理技术已经用于视觉机制的研究,取得了一些成果,现综述如下。

1细胞膜片移植技术

1.1膜片钳技术的起源和发展

膜片钳技术是一种记录通过离子通道的电流来反映细胞膜单一的或多个的离子通道分子活动的技术。应用膜片钳技术可以直接观察和分辨单离子通道电流及其开闭时程、区分离子通道的离子选择性,同时可以发现新的离子通道及亚型,并能在记录单细胞电流和全细胞电流的基础上进一步计算出细胞膜的通道数和开放概率,还可以研究某些胞内或胞外物质对离子通道开闭及离子通道电流的影响。该技术通过微电极与细胞膜之间形成紧密接触的方法,采用电压钳或电流钳对生物膜上离子通道的电活动进行微电技术的记录。该技术经过不断的创新和发展,已成为研究神经系统相关问题的最为主要的方法。

上世纪30年代美国生理学家Hyde发明了微电极,通过微电极来记录细胞在电或化学的刺激下的电活动。到40年代,以Hodgkin为代表的学术研究小组以枪乌贼的轴突为标本进行研究,在动作电位领域,奠定了神经信息的传导理论的基础。1957年以Cole和Hodgkin为代表的研究小组发展了微电极技术,创立了电压钳技术。此技术可以对神经活动中的相关离子活动进行精确地测量。膜片钳技术于1976年被德国科学家Neher和SaKmann建立,并且在1981年得到了完善,从此对生命科学中电生理的研究起了巨大的推动作用。这是人类首次记录到的单通道的离子电流。1980年Sigworth等在电极内施加5~50cmH2O(1cmH2O=0.098kPa)的负压吸引,实现了单根电极既钳制膜片电位又记录单通道电流的突破。1981年Hamill、Marthy、Neher、Sakmann和Sigworth等五人在总结膜片钳的基础上对其进行了重大改进,并完善了游离膜片技术和全细胞记录技术,从而使膜片钳技术走向成熟。1983年10月,SaKmann和Neher主编的《Single-ChannelRecording》一书问世,对当时的膜片钳技术进行了全面、系统的总结。从此奠定了膜片钳技术的里程碑。1995年《Single-ChannelRecording》一书再版,增添了大量膜片钳技术的新内容,成为目前膜片钳技术研究领域的最经典著作。

1.2膜片钳技术在人联网的应用上的不足

经典PCRT作为目前研究细胞电生理的金标准,具有信息含量大,对细胞膜通道电流记录的分辨率高等优点,研究人员将其应用于离子通道离子的选择性、动力学行为、通道类型选择性、记录离子通道的数量和开放概率等方面的研究,在神经科学的研究中发挥了重要的作用。但膜片钳技术自身存在一些无法避免的缺点,例如每次操作只能针对单个细胞,通量低,不能对细胞之间以及整个细胞网络之间的通信进行记录,不能方便地对细胞内液进行换取。在测量时,因为通道表达的不足而引起测量数据的不同,需反复进行实验,并对操作者操作技术要求高,要求技术人员操作时十分谨慎,在显微镜下手动完成吸附、加液、换药、测量等一系列工作。

1.3环境对大鼠视觉发育的影响

随着脑膜片钳技术的发展成熟,80年代后,研究人员将该技术应用于视皮层发育可塑性方面的研究。利用该技术,人们发现了突触传递的长时程增强(long-termpotent