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工业色谱

第一节

概述

色谱（chromatography）又名层析。1903年，俄国植物学家茨维特（Tswett）将植物叶的萃取物倒入填有碳酸钙的直立玻璃管内，加入石油醚洗脱，在碳酸钙上出现了不同颜色的谱带，Tswett将该现象称为“色谱”。1940年，Martin和Synge采用水饱和的硅胶为固定相，含有乙醇的氯仿为流动相来分离乙酰氨基酸，创立了分配色谱。1962年，Klesper等提出了超临界流体色谱。1966年，Ito等提出了逆流色谱。20世纪60年代，还出现了凝胶色谱、亲和色谱及模拟移动床色谱。20世纪70年代，报道了二维高效液相色谱、二维气相色谱。新中国成立以后，我国色谱技术取得长足进步。1953年，中国色谱学科的开创者卢佩章院士和他的研究小组设计出我国第一台色谱仪。我国在逆流研究领域起步较早，张天佑及其合作者于1980年研制出我国第一台逆流色谱仪。

【非凡人物】

卢佩章：我国著名分析化学家、中国色谱分析的先驱者、中国科学院院士。他曾这样写道?：“?一个科学家最大的幸福是能给社会、人类做出些贡献。科学家要有创新，必须有坚实的理论和技术基础。有一颗热爱科学的心，才能选准方向，坚持下去?。”

与其他传统分离技术相比，色谱法具有分离效率高、灵敏度高、分析速度快以及应用范围广的优点。从20世纪初发展至今，色谱技术在理论上从线性色谱发展到非线性色谱，在实践中则从分析规模发展到制备和工业生产规模。工业（制备）色谱是大规模高纯度地分离和制备中药活性组分的重要方法。大孔吸附树脂、离子交换色谱等技术已广泛应用于中药及其复方的药效物质如人参皂苷、银杏黄酮、小檗碱等的生产。随着色谱机制研究的不断深入、高选择性固定相的开发、新型色谱柱技术的出现以及微机控制、馏分收集仪等外围设备的配置，动态轴向压缩、模拟移动床、高速逆流以及制备型超临界流体等多种色谱技术也逐渐引入中药制药工程领域。

一、色谱分离过程的基本原理及理论

（一）分离原理

色谱分离主要是利用物质在不互溶的流动相和固定相之间分配行为（取决于各物质在两相间的分配系数、吸附能力或亲和力等）的差异而被分离。图8-1是对色谱分离过程原理的简单图示。

图8-1色谱分离过程原理

（二）理论基础

1.保留值、分离度和柱效率?保留值是各组分在色谱柱中滞留的数值，通常包括时间、流出色谱柱所需要流动相的体积等参数，如保留时间（?t?R?）、保留体积（?V?R?）、死时间（?t?M?）、死体积（?V?M?）；分离度（?R?）为两峰峰顶之间距离除以此两色谱峰的平均宽度，当分离度等于1.5时，两个色谱峰已完全分离；色谱柱的分离效率（简称柱效）通常用理论塔板数（?n?）或理论塔板高度（?H?）表示。

t?R?：从进样到某个组分在柱后出现峰极大值所需的时间。

V?R?：从进样到某个组分在柱后出现峰极大值所需消耗流动相的体积。

t?M?：不保留物质从进样开始到柱后出现峰极大值所需时间。

V?M?：不保留物质从进样开始到柱后出现峰极大值所需消耗流动相的体积。

R?：用以衡量相邻峰的分离情况，由下式计算

式中，??及??分别为组分1、2的保留时间，?W?1?及?W?2?分别为组分1、2的峰宽（从峰两边的拐点作切线与基线相交部分的宽度）。

n?：在选定的条件下，用对照品或内标计算色谱柱的理论塔板数

式中?t?R?为保留时间，?W?1/2?为峰高一半处的峰宽。

2.非线性色谱?通常分析用色谱的进样量很少，基本上在线性色谱的范畴下工作。在制备色谱中，进样量一般都比较大，这时样品在流动相和固定相中的浓度关系不再是一条直线，相对应的色谱等温线将发生弯曲，较常见的两种类型为凸型和凹型，如图8-2所示。非线性色谱的显著特点：①色谱流出峰形不对称，出现拖尾峰或伸舌峰；②色谱峰的保留时间随样品量的大小而发生变化；③色谱峰高度与样品量的大小不呈正比例关系。

图8-2线性与非线性色谱等温线及相应的洗脱峰型

二、常用固定相

1.硅胶及其衍生的固定相?硅胶是液固吸附色谱的主要固定相，也是液液分配色谱最重要的载体，还可作为化学键合相填料的主要基质材料。硅胶即SiO?2?·?n?H?2?O，属于极性吸附剂，因此在非极性介质中，对极性物质具有较强的吸附作用。它的主要特点是化学惰性，随含水量的增加，吸附能力下降。键合硅胶分极性和非极性两种，常用的极性键合相主要有氰基、氨基和二醇基键合相，最常用的非极性键合硅胶如十八烷基键合硅胶即C?18?。根据制备方法的不同，可得到不同孔径、表面积及颗粒形状的吸附剂。对于制备型液相色谱，固定相颗粒及其大小已经由经典的无定形大颗粒（40～60μm）发展到目前的球形高效细颗粒（0～20μm）。

2.活性炭?活性炭是最普遍使用的吸附剂，它是一种多孔含碳物质，多用于脱色和除臭等过程。活性炭为非极性吸附剂，具有吸附能力