可视化纳米硅携带阿霉素诱导卵巢癌细胞凋亡的机制研究.pdfVIP

中文摘要

肿瘤的诊断和治疗一直是医学研究的关键目标之一。在现有的癌症治疗方法

中，手术和化疗是治疗原发性和转移性恶性肿瘤的重要干预方式。然而，肿瘤的

异质性和复杂性往往导致临床治疗效果不理想。由于肿瘤细胞失控生长和基因异

常表达的特点，肿瘤组织表现出显著不同于正常组织的生理特性。基于肿瘤组织

独特的生理环境，智能纳米药物载体的治疗效果将通过调整其架构来响应这种微

环境而受益。如果反应与所述环境相匹配，将有助于实现载体的稳定转运和分布，

高通透性和靶向递送药物，以及对肿瘤组织的良好摄取和高治疗效率等其他益处。

近几十年来，开发新的药物纳米载体，以应对抵抗癌症治疗的肿瘤微环境，

引起了相当大的关注。同时为有效提高化疗药物的治疗效果，减少对正常组织的

损伤，药物纳米载体也在不断更新换代。

在本研究中，一种新型的二氧化硅纳米载体，双功能化介孔二氧化硅纳米豆

(Dualfunctionalizedmesoporoussilicananobeans，DF-MSNB)，被用来包裹药物阿

霉素(Doxorubicin，DOX)，形成DOX@DF-MSNB复合物。该复合物同时释放药

物，并在环境触发释放包裹的药物和荧光团后追踪细胞对药物的摄取。当检测到

肿瘤微环境中的高GSH水平和低pH值时，药物与载体之间的连接体中的二硫

键断裂。一个附着的荧光基团被激活，DOX药物从载体中释放出来。我们的结

果表明，DOX@DF-MSNB在A2780细胞中与线粒体和溶酶体共定位，使DOX

能够破坏细胞的线粒体功能，激活巨噬细胞和线粒体自噬。线粒体自噬抑制剂的

应用证实DOX@DF-MSNB通过激活线粒体自噬抑制卵巢癌发展。

实验目的：

研究DOX@DF-MSNB复合物在卵巢癌细胞A2780的可视化成像及诱导细

胞凋亡的机制。

实验方法：

1、利用MTT检测DF-MSNB和DOX@DF-MSNB对细胞增殖的影响。

2、免疫荧光检测DF-MSNB和DOX@DF-MSNB与细胞和线粒体的共定位。

3、流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体损伤。

4、Westernblot方法检测线粒体生物合成相关蛋白和自噬相关蛋白的表达水

I

平。

5、qPCR方法检测细胞周期相关基因的表达情况。

实验结果：

1、DF-MSNB对A2780细胞活力无明显影响。DF-MSNB作用后，荧光显

微镜下可见DF-MSNB与A2780细胞共定位。

2、DOX@DF-MSNB可引起A2780细胞周期阻滞，且与A2780细胞活力呈

剂量依赖关系，随着DOX@DF-MSNB剂量的增大，A2780细胞的活力逐渐降低。

3、DOX@DF-MSNB显著增加细胞凋亡率，诱导细胞凋亡。

4、DOX@DF-MSNB可与线粒体共定位，并且随着孵育时间的增加，共定

位线粒体数量变多。DOX@DF-MSNB可引起细胞线粒体损伤，导致线粒体膜电

位减低，线粒体损伤引起线粒体内ROS异常增多。

5、DOX@DF-MSNB可降低线粒体生物合成调节因子PGC1-α和线粒体生

物合成蛋白标记物Nrf1、Nrf2和TFAM的表达，表明其通过影响线粒体的生物

合成抑制肿瘤的发生和增殖。

6、DOX@DF-MSNB与溶酶体共定位。除线粒体自噬外，DOX@DF-MSNB

还调节一般细胞自噬。Westernblot实验显示，DOX@DF-MSNB处理后自噬溶

酶体生成增加。DOX@DF-MSNB激活了A2780细胞的线粒体自噬。

7、线粒体自噬Mdivi-1抑制剂可减弱DOX的杀伤作用，MTT结果显示，

Mdivi-1与DOX@DF-MSNB联合处理和DOX@DF-MSNB单独处理的细胞相比，

Mdivi-1抑制剂和DOX@DF-MSNB联合处理的细胞活力提高。Westernblot实验

也表明Mdivi-1可抑制线粒体自噬，减少细胞凋亡。证明线粒体自噬在促进DOX

杀伤癌细胞中发挥重要作用。抑制线粒体自噬在一定程度上有助于减少细胞死亡。

研究结论：

1、二氧化硅纳米载体可作为良好的药物负载材料，无显著细胞毒性且可实

现细胞内的可视化。

2、二氧化硅纳米载体携带阿霉素DOX@DF-MSNB通