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宁波大学硕士学位论文
应用多位点序列分型技术对幽门螺杆菌混合感染的调查
摘要
背景：
HelicobacterpyloriH.pylori
幽门螺杆菌（，）是人类胃肠道疾病最常见的感染性病
原体，可引起各种胃炎、消化性溃疡、胃癌等。H.pylori感染分为单一感染和混合感染。
其混合感染流行率在不同地区存在很大差异。H.pylori主要在胃部（胃窦、胃体）定植，
也可在胃以外的消化道部位（如十二指肠）定植。目前有关H.pylori混合感染的研究多
数是基于来自单一宿主的胃窦（或胃窦、胃体）活检标本。然而，缺少对十二指肠球部
H.pylori
活检标本的检测。混合感染患者定植菌株之间的进化关联性也需要进一步探索。
MLSTH.pylori
此外，应用多位点序列分型（）可以对进行地理关联分群，可作为推测
人类迁徙历史的工具。宁波地区患者感染的H.pylori菌株还缺少这方面的数据。
目的：
应用MLST基因分型技术调查宁波地区患者H.pylori混合感染的流行性。揭示H.
pylori混合感染患者胃窦、胃体和十二指肠球部定植菌株之间的进化关系。确定定植于
胃窦、胃体和十二指肠球部的H.pylori菌株是否具有同源性。绘制宁波地区H.pylori
菌株的地理关联分群。
方法：
1.使用谷氏幽门螺杆菌快速分离培养、鉴定、药敏试剂盒对宁波地区两家医院实施
33H.pylori
内窥镜检查和病理染色的患者开展常规细菌培养。随机选取例阳性患者，
从这些患者的胃窦、胃体和或十二指肠球部的活检标本中获得/H.pylori分离株。随机
选取6例患者的单个分离株作为基因分型对照，这6例不纳入混合感染的研究。另外传
6H.pyloriATCCATCC43629ATCC700392
代复活株美国菌种保藏中心（）参考菌株（、、
ATCC51932、ATCC700824、ATCC43579和ATCC49503）作为基因分型对照。应用革兰
染色、脲酶、触酶、氧化酶试验和抗原试验对所有H.pylori菌株进行鉴定。
2.利用MLST技术对所有的H.pylori菌株进行基因分型，获得每个菌株的序列类
型（ST）和相应的管家基因编号。
3.对每个菌株的管家基因进行谱系分析、系统发育分析和遗传多样性分析，来揭示
H.pylori混合感染菌株间的进化动力学。
4.从PubMLST网站下载已确定地理分群的H.pylori管家基因串联序列，与本研究
中获得的H.pylori管家基因串联序列进行多序列比对。比对后应用MEGA11软件构建
I
应用多位点序列分型技术对幽门螺杆菌混合感染的调查
系统发育树，确定本研究中H.pylori菌株的地理种群结构。
结果：
1.33156H.pylori6H.pyloriATCC
从例患者中共获得株分离株，以及成功复活株
参考菌株。
2.MLST162H.pylori55ST12H.pylori
将株菌株分成了个型，其中作为对照的株
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