病理冰冻切片制备失败应急处置演练脚本.docxVIP

病理冰冻切片制备失败应急处置演练脚本

场景一：冰冻切片制备中突发组织碎裂

时间：工作日上午9:15

地点：医院病理科冰冻切片室

人物：

1.张技师（冰冻切片主操作技师，8年从业经验）

2.李技师（辅助技师，3年从业经验）

3.王医生（手术科室送检医师，骨科副主任医师）

4.刘主任（病理科主任，15年诊断经验）

5.赵护士（病理科样本接收岗护士）

【场景展开】

张技师正专注于一台骨科脊柱肿瘤冰冻切片制备，送检组织是从患者胸12椎体处切除的灰黄色结节样组织，体积约2cm×1.5cm×1cm，临床申请单标注“明确良恶性，指导手术范围”。此前已用OCT包埋剂将组织固定于冰冻托上，置入LeicaCM1950冰冻切片机内，设置温度为-20℃，等待组织充分冷冻。

“张老师，组织已经冻了8分钟了，应该可以切了吧？”李技师凑过来查看切片机显示屏上的温度曲线，此时组织表面温度稳定在-19.8℃。张技师点点头：“嗯，这个大小的软组织差不多了，我先试切几刀修修面。”他转动切片机手轮，刀片缓慢接触组织，第一刀下去，组织表面出现不规则的裂痕，第二刀刚切入1/3，整块组织突然从包埋剂中碎裂，碎块散落于切片机仓内，最大的碎块不足0.5cm。

“坏了，组织碎了！”李技师低呼一声，连忙按住切片机的停止按钮。张技师立刻打开仓门，戴上低温手套小心捡拾组织碎块，眉头紧锁：“组织质地偏韧，可能是冷冻时间不够？不对，温度是达标的，难道是临床送检时没有固定？”他一边将碎块放入盛有少量OCT的小离心管中暂存，一边让李技师去核对送检样本的接收记录。

李技师快速翻找样本登记本：“接收时间是8:45，当时赵护士核对过，组织是新鲜标本，临床用生理盐水纱布包裹送来的，没有固定液。”张技师顿时了然：“新鲜软组织含水分多，快速冷冻时细胞内冰晶形成膨胀，加上组织本身的韧性，就容易碎裂。而且这个肿瘤组织可能存在黏液样变性，质地不均匀，冷冻时应力分布不均，也是碎裂的原因。”

此时，手术科室的王医生推门进来，手里拿着手机：“张技师，那边手术等结果呢，大概还要多久？”张技师迎上去，语气带着歉意但很镇定：“王医生，实在抱歉，刚才切片时组织突发碎裂，我们正在紧急处理。您先坐，我跟您说下情况——这个组织是新鲜送检的，没有经过固定，加上肿瘤可能有黏液变性，冷冻时发生了碎裂，目前我们已经把碎块收集起来了，正在想办法重新包埋切片。”

王医生脸色立刻沉了下来：“那可不行啊，患者现在还在手术台上开着胸呢，多等一分钟就多一分风险，你们能不能快点？”张技师连忙安抚：“您放心，我们有应急预案，现在有两个方案：一是把碎块重新拼起来包埋，调整冷冻温度和时间，争取尽快切出合格切片；二是如果重新包埋还是不行，我们立刻联系临床再取一点标本，但这样会耽误更多时间。我们先试第一个方案，我亲自操作，10分钟内给您结果。”

张技师转身对李技师下达指令：“小李，你立刻准备一个新的冰冻托，把OCT提前放在-20℃冰箱预冷；再拿一个小烧杯，装37℃的温水，放在切片机旁边。我把组织碎块在OCT里拼一下，注意尽量保持原来的形态，尤其是和正常组织交界的部分。”他将收集到的5块组织碎块取出，在冰冻托上按照大致的解剖位置拼接，用细镊子轻轻按压，让碎块之间尽量贴合，然后缓慢倒入预冷的OCT包埋剂，覆盖组织表面约2mm厚。

“这次不能直接放切片机里冻了，得用骤冷法。”张技师将拼好的冰冻托快速放入盛有液氮的小容器中（提前备好的应急设备），只听“嗤”的一声，OCT迅速冻结成白色透明状，整个过程仅用15秒。他立刻将托子转入切片机，调整温度为-22℃，同时让李技师用37℃温水擦拭刀片表面：“刀片温度和组织温度差太大也会导致碎裂，温水擦一下能缩小温差，而且刀片要保持锋利，你把备用的新刀片拿过来，我换刀片。”

5分钟后，张技师开始试切，第一刀下去，组织表面平整，没有碎裂，他调整切片厚度为4μm，连续切出3张完整的切片，用毛笔轻轻转移至载玻片上，放入95%乙醇中固定30秒，再用苏木素-伊红（HE）快速染色。此时王医生在旁边全程看着，紧张的神色稍有缓解：“张老师，这切出来的片子看起来还行吧？”张技师指着显微镜下的图像：“您看，细胞形态完整，没有冰晶破坏，虽然是碎块拼的，但病变区域都在，应该能满足诊断需求。”

李技师将染好的切片递给刘主任，刘主任仔细观察5分钟后，签发“（胸12椎体）符合软骨肉瘤Ⅱ级，建议扩大切除至正常骨组织边缘2cm以上。”张技师立刻打电话给手术室内的王医生：“王医生，结果出来了，软骨肉瘤Ⅱ级，建议扩大切除。”王医生松了口气：“太好了，谢谢你们，不然我们真不知道该怎么继续了。”

事后，张技师和李技师一起清理切片机，张技师叮嘱道：“这次的教训要记下来，对于新鲜黏液样变性的软组织，不能用常规的缓慢冷冻法，必须用液氮骤冷，而且冷冻时间要严格控