微核技术概述及其应用现状研究.docVIP

【标题】微核技术概述及其应用现状研究 【作者】邹 峰 【关键词】微核??微核技术??微核试验??监测 【指导老师】何秀利 【专业】生物科学 【正文】1引言近年来，微核技术已受到科学界和广大人民群众的关注，并得到广泛应用。随着科学技术的日益发展，人们的生活水平的不断提高，微核技术的研究将会有很大的发展空间。微核技术试验方法产生于20世纪70年代，是一种快速检测细胞遗传学效应的方法。自Matter和Schmid利用啮齿动物骨髓细胞作为试验材料来测定疑有诱变活性的化合物以来，微核试验以其经济、简便、快速、敏感、特异、准确等特点，成为检测致突变剂和环境污染物等的快速初筛试验，目前许多国家和国际组织，已将其规定为新药、食品添加剂、农药、化妆品等毒理学安全行评价的必做实验[1,2]。由于试验材料和方法的不同，微核试验可进行体内研究和体外研究。近年来，由于采用敏感动物试验的结果推到人具有不确定性，饲养动物的环境设施、营养供给、动物福利要求高，耗资大；以及自英国动物学家Welliam Russell和微生物学家Rex Burch提出科学实验的“3R”原则（Reduction、replacement、Refinement,减少、代替和优化）以来，微核技术得到了很大的发展。研究表明体外微核试验获得的微核率与体内实验显微镜检测有交好的一致性，在敏感性、特异性和准确性方面，与经典的染色体畸变分析方法基本相当。经济合作与发展组织（OECD）正在进行体外微核试验准则的修订，准备将之引进OECD试验指南。随着分子生物学技术的引进和自动化检测等研究的完善，体外微核技术不仅能检测细胞微核率，还能分析微核来源，并快速精确检测非整倍体。欧洲替代试验有效性试验中心（ECVAM）正在研究以其替代染色体畸变试验，在不久的将来或许会替代小鼠骨髓嗜多染细胞微核试验[3]。为更加详细了解微核技术的研究进展，本文就国内外有关微核技术的概况、应用现状及其前景等综述如下。2?微核技术概述2.1微核的产生微核的产生，是由于生物体的染色体（染色质）在复制过程中，常会发生损伤、断裂，导致产生一些碎片[4]。这些碎片在一般情况下，大多数能自动与原来的染色体愈合恢复原状，细胞的染色体畸变率也就较低，微核也少，细胞能进行正常的生命活动。但是，如果受到环境中的辐射和其他诱变因子的作用，或细胞内有污染物，往往就会促使染色体的断裂加剧，在有丝分裂或减数分裂中就会出现不能愈合的染色体片段（其中分裂间期主要表现为微核、双核、核出芽以及核变形；分裂期主要表现为染色体断片、多桥、粘连、滞后以及核破裂，有的还出现多极化现象等细胞遗传损伤效应[5]），这些断片由于缺少了着丝点，不能够移向两极，而停留在细胞质中，当新的细胞核形成时，就在细胞质中形成大小不等，着色与主核相同且具有微小包膜的球体，即微核。微核是染色体畸变类型之一，其形态多种多样，但与主核相比，有自己清晰的轮廓，可与主核分离，也可以丝或蒂与主核相连，大小只有主核的三分之一以下。微核是环境中致畸变物对生物细胞的损伤。反之，也可以利用微核作为一种评价遗传毒性的指标，用于监测辐射损伤、药物筛选、肿瘤防治的实验研究，以及环境质量评价。目前，许多国际性机构和国家，如国际经济合作与发展组织、国际环境诱变剂和致癌剂防护委员会、美国环保局、日本国立卫生实验所以及我国卫生部等等，均已把它列为诱变试验的常规方法。??2.2?微核的形成机理2.2.1?化学毒性物质所致微核????丝毒性药物，如秋水仙碱、HO-221等能直接抑制动物细胞纺锤丝的形成，阻止细胞分裂中纺锤丝将染色体拉至细胞两端。Ando-N等应用抗肿瘤药（HO-221）抑制纺锤丝微管组装，破坏纺锤丝，结果在染色体分析时诱导出多倍体和亚二倍体细胞，未见染色体断裂，鼠体内细胞也常被诱导出较大的微核。有机苯能引起微核增多且有明显的致癌作用，苯三酚（1、2、4-苯三酚、BT）在氧化成醌时产生活性氧损伤DNA和其它一些细胞大分子，实验中，BT能使淋巴细胞微核率上升2倍，使HK-60细胞微核率上升8倍，且总微核数在两类细胞呈相关性增高，不仅引起染色体数目和结构的变化，而且通过产生新生氧间接引发点突变[6-10]。2.2.2?细胞组成成分缺乏所致的微核??有作者对9位健康志愿者进行了叶酸限量实验，从基础用量的195mg/d，减到每天56mg，维持五周，然后慢慢补充叶酸，减量后的双核频率增高，且着丝点阳性和阴性的微核都有所增加[11,12]。当叶酸补充后，两类细胞微核率明显下降，着丝点阳性微核变化更为显著，实验表明，低叶酸血症在临床贫血症状之前就出现了血液和口腔粘膜细胞遗传物质损伤[13]。2.2.3?其它致微核因素体内外细胞放射性照射，也是导致遗传物质损伤诱发微核形成的一个重要因素