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第 35卷 第 5期 南京林业 大学学报 (自然科学版 ) Vo1．35．No．5
2011年9月 JournalofNanjingForestryUniversity(NaturalScienceEdition) Sept．，2011
http：／／www．nldxb．COB[doi：10．3969／j．issn．1000—2006．2011．05．025]
油茶 SRAP—PCR反应体系的建立
吴莺莺 ，彭方仁 ，郝明灼 ，陈隆升 ，陈永忠
(1．南京林业大学森林资源与环境学院，江苏 南京 210037；2．湖南省林业科学院，湖南 长沙 410004)
摘要：以油茶品种大别山2号和赣兴46为试验材料，利用Me5Em8正反 向引物组合进行了SRAP
— PCR反应体系的L。(3)正交试验 ，采用正交设计直观分析及方差分析对影响 SRAP反应的
Taq聚合酶、Mg 、dNTP和引物浓度进行分析，并对模板DNA浓度进行了单因素试验分析。结
果表明，油茶 SRAP—PCR20IxL反应体系的最佳组合为：Taq聚合酶 1．20Ixmol／min、Mg 浓度
1．25mmol／L、dNTP浓度 0．15mmol／L、Primer浓度 0．60I~mol／L、模板DNA含量6Ong，并含有
2 L10xbuffer(Mg“free)。各因素对油茶SRAP—PCR反应的影响大小依次为：dNTP、Mgn、
Taq聚合酶、Primer。
关键词：油茶；SRAP；反应体系；正交设计
中图分类号：$722 文献标志码 ：A 文章编号：1000—2006(2011)05—0l12—05
Establishmentreactionsystem oftheSRAP-PCRinCamelliaoleifera
wu Yingying ，PENG Fangrenh HAOMingzhuo ，CHEN Longsheng ，CHEN Yongzhong
，
(1．CollegeofForestResourcesandEnvironment，NamingForestryUniversity，Naming210037，China；
2．HunanForestryAcademy，Changsha410004，China)
Abstract：Inthispaper，orthogonaldesigntoSRAP—PCRsystemforCamelliaolefieracuhivarDabieshan2andGanxing
46wasconductedwiththeprimerscombinationofMe5andEm8．Orthogonaldesign—directanalysisandvarianceanalysis
wereappliedtooptimizeSRAP-PCR amplificationsystem in4factorssuchas DNA polymerase，Mg2 dNTP and
，
primer．TemplateDNA wasalsoanalyzedbythesingleelementtest．Theresultsindicatedthatanoptimalreactionsys—
tem (20 L)ofSRAP—PCRsystemwasestablished：1．20ixmolfminTaqDNApolymerase1．25mmo~LMg“，0．15
mmot／LdNTP，0．60~moVLprimer，60ngtemplateDNAand2IxL10buffer(Mg“free)．And，theorderofeach
factorlevelsaffectedontheresultofSRAP—PCR wasdNTP，Mg“，TaqDNA polymeras
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