农杆菌介导FT基因转化嘎拉苹果的研究.pdfVIP

● C T ● IIBRICULTURgE 华北农学报 ·2008，23(6)：41．45 明畦aLl-SiHIGli 农杆菌介导 基因转化嘎拉苹果的研究 孟玉平 ，曹秋芬 ，周 慧 ，杜建 中 ，曹尚银 (1．山西省农业生物技术研究中心 ，山西 太原 030031；2．中国农业科学院 郑州果树研究所 ，河南 郑州 450009) 摘要：用农杆菌介导法对苹果品种嘎拉转化 F 基因进行了研究 ，建立了苹果离体叶片高效再生体系，在含 BA5 mg／L+IAA0．5mg／L的MS培养基上 ，以离体叶片远轴面(叶背面)向上 ，经过 14d的暗培养获得再生不定芽和再生 植株，再生率达 97％。在转基因再生体系中，以头孢噻肟钠500mg／L和卡那霉素 5mg／L，作为脱菌培养和选择培养的 条件 ，经过感染携带拟南芥 刀 基因的农杆菌，获得 了一批转 ， 基 因的植株，经 PCR检测 ，目的基 因已经整合到苹果 基 因组 中。 关键词 ：苹果；农杆菌；， 基因；遗传转化 中图分类号：Q785 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—7091(2008)06—0041—05 TransformationofAppleCultivarGalawitha FT Gene MediatedbyAgrobacteriumtumefaciens MENGYu—ping，CAOQiu—fen，ZHOUHui，DUJian—zhong，CAOShang—yin (1．TheAgri—BiotechnologyResearchCenterofShanxiProvince，Taiyuan 030031，China； 2．ZhengzhouFruitResearchInstitute，TheChineseAcademyofAgricultureSciences，Zhengzhou 450009，China) Abstract：Inthisstudy，high—frequencyregenerationsystemwasfoundedinleafbladeexplantsofapplecuhivaGala， whichweretransformatedbyAgrobacteria-mediatedwith FTgene．Duringcultivating，itwasimportanttokeeptheanti— COUSsurfaceofleafnotcontactwiththesurfaceofMScultivation，after14ddarkcultivation，theregenerationbudsand shootswereobtaintedinMS(theMScultivationcontained：5mg／LBA，0．5mg／LIAA)，inthistransformationsystem， theregenerationfrequecywasupto97％．Usingeefotaximesodium (500mg／L)andKanamycin(5mg／L)asthein— hibitorofAgrobacteriaovergrowthandselectionpressure，theexplantswereinfectedwithAgrobacteriathatcontaintedFT gene，thenachieved FT genetransgenicplants．TheresultsofPCR amplificationsuggestedthatFT genehasintegrated intoappleplantsgenomes． Keywords：Apple；Agrobacteriumtumefaciens；FTgene；Genetictransfomration 苹果是我 国重要 的经济树种 ，由于其生长周期 片或茎段取材容易，易于离体再生 ，可将再生不定芽 长、童期长，使得利用常规杂交育种进行新品种选育 转化为单细胞起源纯合体等。因此 ，利用根癌农杆 和性状改 良需要耗费大量 的人力 、物力和财力。而