晚期糖基化终末产物受体在不同转移潜能人肝癌细胞系中的作用及其机制与研究.pdfVIP

第八届全国肝脏疾病临床学术大会 ·235· 晚期糖基化终末产物受体在不同转移潜能 人肝癌细胞系中的作用及其机制研究 长沙，中南大学湘雅医院感染病科(410008) 易盼盼陈若婵萧梅芳范学工 【摘要】 目的 blot分别从mRNA及蛋白水平检测三种不同转移潜能人肝 路在其调控过程中的作用。方法本研究通过RT-PCR和Wegtem P65、P50mRNA及蛋白表达水平。结果高转移潜能 blot检测NF—kB 愈合实验检测细胞的迁移能力，RT-PCR和Westem RAGE 人肝癌细胞系HCCLM3 表达减弱或RAGE信号通路受抑后HCCLM3细胞NF—kBPS0、P65 与肝癌细胞转移潜能相关，并可通过NF—kB信号通路介导肝癌细胞增殖、侵袭及转移。 【关键词】癌，肝细胞； 侵袭； 转移； 晚期糖基化终末产物受体； 核因子一kB 原发性肝细胞癌(HCC)是最常见的恶性肿瘤之一，病死率极高，在所有癌症中居第三位，并在世界范围 内呈逐年递增趋势[1-210其主要致死因素为肝癌的复发和转移，具体机制目前仍未明确，因此深入研究HCC发生、 侵袭及转移的分子机制，有助于发现潜在的预防和治疗HCC发生、发展的策略和途径。晚期糖基化终末产物 foradvanced end 受体(receptor glycation 力的影响的相关研究鲜见报道。 RAGE胞外段即可溶性RAGE(soluble 通路从而促进肝癌细胞的发生发展和转移，因此本研究通过体外观察不同转移潜能肝癌细胞系RAGE表达隋 过程中的作用，为肝癌的治疗寻找新的药物靶点。 材料与方法 (上海吉玛公司产品)；转染试剂Lipofectamine Transwell小室(Coming 体(Abcam公司产品)，兔抗人GADPH多克隆抗体(Cell萄鲫al P65 单克隆抗体及兔抗人NF—k13PS0多克隆抗体(Santacruz公司产品)。 111l培养瓶，用含llY／o胎牛血清的 2．细胞培养：细胞系Hep3B、MHCC97L及HCCLM3均接种于50 肝癌 800／o左右，用0。25％胰酶消化，离心收集细胞于1．51111离心管，一70℃冻存备用。 3．RNA干扰试验：按照上海吉玛公司转染试剂盒说明书进行，培养HCCLM3细胞进人对数期后，胰酶消化， h 后细胞融合度达80％左右，弃去旧的细胞培养液，加入新鲜的含10％胎牛血清的DMEM培养液，1．9ml／孔。 取两个消毒无RNA酶的离心管，分别配制含5“lIjpo五eccamjne siRNA的OpI-MEM稀释液50ul(m斟A终浓度75nmol／L)，轻轻混匀，室温静置5rain。将2管液体充分混匀， 室温静置20lin，形成RNA-Hpofectamine 2000的组为空白对照组(Mock组)。RAGE≤RNA序列：正义：5 7， 7 一ACGUGACACGUUCGGAGAA，】H’-3 GUCACGUTT一3 7。 7，反义：5 ul加入96孔板中，实验组分别加入Hpof蛐e rag／ h后，加入稀释、灭菌的MTr(5mg／m1)50