细胞培养中珍贵贴壁细胞污染挽救方法的评价.pdfVIP

2011 2月 首 都 医 科 大 学 学 报 Feb．2011 第32卷 第 1期 JournalofCapitalMedicalUniversity V0j．32 No．1 [doi：10．3969／j．issn．1006-7795．2011．01．026] · 基 础 研 究 · 细胞培养中珍贵贴壁细胞污染挽救方法的评价 王 鸿 ， 张 伟 ， 孟 娜 ， (1．首都医科大学附属北京同仁医院耳鼻咽喉头颈外科；2．教育部耳鼻咽喉头颈外科重点实验室，北京市耳鼻咽喉科研究所) 摘【要】 目的 细菌污染在细胞培养工作中在所难免，特别是珍稀细胞系受到细菌污染，污染后能否逆转，哪种方法可以挽救 污染细胞既有效又对细胞生物学特性影响小，是本文探讨的目的。方法 分别采用抗生素除菌法 、抗生素联合巨噬细胞吞噬法 和裸鼠体内接种除菌法清除人喉鳞状细胞癌细胞系(1aryngealsquamouscarcinoma-1，LSC一1)的污染细菌，并对除菌效果做无菌检 验，对细胞性状做免疫组织化学角蛋白染色和流式细胞仪DNA倍体分析，并与第3代细胞比较。结果 ① 在3种敏感抗生素 中，32mg／L的头孢哌酮／舒巴坦抗菌效果最好，细胞可传代3次；头孢哌酮／舒巴坦联合巨噬细胞吞噬法处理，细胞可传代5～6 次，但抗生素撤离后上述2种方法培养的细胞液中均再次出现细菌，细胞逐渐死亡。裸鼠体内接种法的细胞形态最好，传代8次 以上，冻存、复苏后仍能生长繁殖 ，并可在无抗生素培养基中生长，上清液细菌培养为阴性；② 免疫组织化学角蛋白染色，抗生素 法和抗生素联合巨噬细胞法所得细胞的角蛋白表达比例较低，而裸 鼠体内接种法得到的细胞角蛋白表达较高，与该细胞系第3 代比例基本相同；③ DNA倍体分析，裸鼠体内接种法的细胞仍保持有二倍体和异倍体核型，与第3代细胞基本相同，而抗生素处 理的细胞只保留有二倍体核型。结论 裸 鼠体内接种除菌法能彻底清除喉癌细胞系中的污染细菌，并能保持肿瘤细胞的来源特 征和增生活性，是细胞系去除污染细菌最为理想的方法。 【关键词】 贴壁细胞系；污染；挽救 【中图分类号】 Q813．11 EvaluationofM ethodsforRescuingNovelAdherentCellLineContaminated byBacteriainCellCulture WANG Hong ，ZHANG Wei， ，MENGNa， (1．DepartmentofOtorhinolaryngologyHeadandNeckSurgery，BeringTongrenHospital，CapitalMedicalUniversity； 2．KeyLaboratoryofOtorhinolaryngologyHeadand NeckSurgery，BejiingInstituteofOtorhinolaryngology) A【BSTRACT】 Objective Tocomparethemethodsforrescuingthecelllinecontaminatedbybacteria．Methods Antibioticsor antibioticcombinedwithmacrophageoranimalinoculationwereusedtoeliminatethebacteriainlaryngealsquamouscarcinomacellline LSC．1．Thencytokeratin(CK AEl／AE3)andDNA ploidyinLSC一1cellsweredetectedby immunohistochemicalandflow cytometer analysis．Results (11)Ceofperazone／Sulbactamatadoseof32m LwasthebestoneinthreesensitiveantibioticsandmadeLSC．1cells tosurvivethreepassages．Cefoperazone／Sulbactam combinedwithmacrophagemadeISC一1cellstosurvive5—6passages．Butinthetwo methods．bacteriaappearedagainwhen