产纤维素酶菌株Pantoea+ananatis+P5的筛选鉴定和活性研究.pdfVIP

第 28卷第 4期 徐 州 工 程 学 院 学 报 (自然 科 学 版 ) 2013年 12月 Vo1．28No．4 JournalofXuzhou InstituteofTechnology (NaturalSciencesEdition) Dec．2O13 产纤维素酶菌株 PantoeaananatisP5的筛选鉴定和活性研究 侯进慧，刘 彤 ，李 同祥 (徐 州工程学院，江苏 {余州 2211l1) 摘要：对一种新型纤维素酶产生菌株 P5进行 了筛选鉴定和活性研究．该纤维素酶产生菌株在 中国普通微生物保藏管理中心的保藏号是 CGMCCNO．5356．利用产纤维素酶菌株筛选培养基， 从土壤中筛选到一株产生纤维素酶菌株 P5，对该菌株进行 了分子鉴定和纤维素酶活性分析．结果 显示，菌株 P5分类上是 Pantoeaananatis菌株 ，其纤维素酶适应温度和酸碱度范围较广，可应用于 生物、食品、能源、纺织等领域． 关键词 ：纤维素酶 ；Pantoeaananatis；分类 中图分类号：Q93-331 文献标志码 ：A 文章编号：1674—358X(2013)04—0080—05 在地球上 ，纤维素是 自然界中分布广泛且产量最丰富的一种碳水化合物资源 ，但是 由于降解困难 ，导致 纤维素资源的利用率非常低．比如秸秆和皮壳等纤维素含量高的原料大部分都被焚烧掉 ，这样做既危害生态 平衡 ，又加重了环境污染．纤维素分子可以被纤维素酶降解成小分子 ，并最终降解成葡萄糖．纤维素酶是一个 酶系，能水解 J3—1，4一葡萄糖苷键．纤维素酶的研究是纤维素资源综合利用的基础_1]． 微生物是个巨大的基因资源库 ，其中含有多种有价值的生物酶．目前 ，用于纤维素生物降解研究的微生 物大多属于真菌 ，而在细菌 中筛选开发高效纤维素降解菌和纤维素酶的研究相对较少．纤维素降解细菌的研 究大多集 中在芽胞杆菌类 ，在 Pantoeaananatis方面的研究未有报道l3]．随着分子生物学 、基因工程 的迅猛 发展 ，国内外均尝试应用基因工程技术来筛选 、改造和构建高效纤维素降解菌株 、开发新型高效的纤维素酶． 因此 ，需要通过生物技术方法加大对细菌纤维素酶的研究，以开发出新型的纤维素酶 ]．本文采用产纤维素 酶菌株筛选培养基 ，获得一株纤维素酶产生菌 P5，对菌株进行 了鉴定 ，并对该菌株纤维素酶特性进行 了 分析． 1 技术特征 本文属于生物技术领域 ，涉及一株纤维素酶产生菌 P5及其筛选及菌种鉴定的方法 ，所筛选到的细菌的 纤维素酶适应温度和酸碱度范围较广．该菌属于 Pantoeaananatis菌株 ，已于 2011年 10月 17日保藏于中 国普通微生物保藏管理中心． 1)筛选到的一株纤维素酶产生菌 ，在中国普通微生物保藏管理 中心进行了专利菌种保藏 ，其保藏号为 ： CGM CC NO．5356． 2)所述纤维素酶产生菌P5的制备方法 ，其特征在于： 从腐烂植物枝叶表面及附近的土壤中分离样品，样品加入5omLLB培养基 中，在250mL锥形瓶 中，以 160r／min转速于 37℃培养 24h涂布于 LB固体平板上，获得菌株 ；所述 LB液体培养基组分为：每升蒸馏 水 中含有蛋 白胨 10g，酵母粉 5g，NaC110g；所述 IB固体平板组分为 ：每升蒸馏水 中含有蛋白胨 10g，酵母 粉 5g，NaC110g，琼脂粉 12g． 将菌落接种到产纤维素酶菌株筛选培养基 ，于培养温箱中培养 2～4d，筛选纤维素酶的产生菌，所用的 培养基为：每升培养基中含有羧 甲基纤维素钠 10g，蛋 白胨 10g，酵母粉 5g，KH PO 1g，MgSO 0．2g， 收稿 日期 ：2Ol3-07—29 基金项 目：江苏省高校 自然科学基金面上项 目(12KJD55OO03)，徐州工程学院校级培育课题 专利号 ：2ol110348074．0 作者简介 ：侯进慧(1980～)，男，江苏徐州人 ，副教授 ，博士，主要从事生物工程研 究． · 80 · 侯进慧，等 ：产纤维素酶菌株 PantoeaananatisP5的筛选鉴定和活性研究 NaCI10g，葡萄糖 2g，琼脂粉 12g，以蒸馏水补足体积至 1I； 将质量分数 0．5 的