2010年执业药师考试辅导《药物分析》(冲刺班)讲义0601.docVIP

第六章　色谱法第一节　概　论 　　● 基本概念：　　色谱法：是一种物理或物理化学分离分析方法。　　优点：高灵敏度、高选择性、高效能、分析速度快、应用范围广。　　应用：各国药典中广泛用作定性鉴别、纯度检查、含量测定。　　分类：　　1.流动相：气体→ 气相色谱法　　　　　　　液体→ 液相色谱法　　固定相：固体或液体　　　　　　气－固色谱法；气－液色谱法　　　　　　液－固色谱法；液－液色谱法　　2.操作形式：柱色谱法、平面色谱法、电泳法　　3.分离机制：　　分配色谱--固定相为：液体　　吸附色谱--固定相为：固体（吸附剂）　　离子交换色谱--固定相为：离子交换树脂　　分子排阻色谱法--固定相为：多孔性填料　　● 色谱过程　　是物质分子在相对运动的两相（固定相和流动相）间分配平衡过程，可用分配系数（K）和容量因子（k）来描述。　　分配系数：组分在固定相和流动相之间的分配平衡时的浓度之比。　　　　CS为平衡时组分在固定相中的浓度；Cm为平衡时组分在流动相中的浓度　　K:除与固定相、流动相的性质及温度有关外，与组分自身的特有着极大的关系。　　容量因子：达到分配平衡后，组分在固定相和流动相中的质量之比。　　　　k: 与组分、固定相、流动相的性质及温度有关；与两相体积有关。　　（k比K更易测定，常用k代替K）　　kA≠kB 是分离的先决条件 第二节　薄层色谱法 　　● 薄层色谱法：　　薄层色谱法（thin layer chromatography，TLC）系将供试品溶液点样于涂布有固定相的薄层板上，经展开、检视后所得的色谱图，与适宜的对照物按同法操作所得的色谱图进行比较，主要用于药品的鉴别或杂质检查。　　● 薄层色谱法的操作方法　　制板——点样——展开——定位——结果　　制板：将固定相涂布在薄板上　　常用固定相：硅胶、硅藻土、氧化铝、微晶纤维素、聚酰胺　　涂布方法：研磨——除气泡——涂布——晾干——活化　　活化方法：在110℃加热30分钟（目的：使硅胶吸附力增强）　　点样：将样品点在薄层板上　　点样要求：一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，样点直径为2～4mm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般为1.0～2.0cm。点样时必须注意勿损伤薄层板表面。　　展开剂：可以是单一溶剂，可以用不同试剂按一定比例组成的混合溶剂。浸入展开剂的深度为距薄层底边0.5～1.0cm（切勿将样品点浸入展开剂中）　　定位：记录展开剂前沿，及各斑点的位置　　结果检视：　　光学法：有色斑点、荧光淬灭、发射荧光：254nm，365nm　　化学法：显色剂显色　　● 色谱系统适用性试验　　包括：检测灵敏度、比移植、分离效能　　1.检测灵敏度　　采用对照溶液稀释若干倍的溶液与供试品溶液和对照溶液在规定的色谱条件下，在同一块薄层板上点样、展开、检视，前者应显示清晰的斑点。　　2.比移植　　　　实践中，Rf值的最佳范围是0.3～0.5，可用范围是0.2～0.8。　　3.分离效能　　分离效能以分离度表示，分离度（R）系指两个相邻斑点中心距离与两斑点的平均宽度（直径）的比值。　　R = 2d/（W1+W2）　　　　● 薄层色谱的应用　　1.定性分析：供试品、对照品点在同一薄层板上→展开显色后→供试品、对照品比移值一致→可认为供试品与对照品是同一物质。　　2.杂质检查：　　杂质对照品法：供试品、杂质、对照品点在同一薄层板上→…→杂质斑点颜色与对照品斑点比较，不得更深→可认为未超过规定的含杂质最高限量。　　自身稀释对照法：以供试品溶液的稀溶液作为对照液，方法同上　　判断：供试品所显杂质斑点与对照液主斑点比较，不得更深　　06-09试题分析：　　1.薄层色谱的操作方法（08、09）　　2.薄层色谱的系统适用性试验（07）　　★习题举例　　最佳选择题　　硅胶薄层板使用前在110℃加热30分钟，这一过程称为　　A.去活化　　B.活化　　C.再生　　D.饱和　　E.平衡 　　[答疑编号181060101] 　　『正确答案』B 　　关于薄层色谱的点样与展开，以下叙述正确的是　　A.点样的样点必须为圆点　　B.点样基线距底边越近越好，一般小于1.Ocm　　C.样点直径一般为2～4cm　　D.每块板只能点1个样点，以防斑点间干扰　　E.展开时，薄层板浸入展开剂的深度为距薄层底边0.5～1.0cm 　　[答疑编号181060102] 　　『正确答案』E 　　多项选择题　　薄层色谱系统适用性试验的内容有　　A.检测灵敏度　　B.精密度　　C.比移值　　D.拖尾因子　　E.分离效能 　　[答疑编号181060103] 　　『正确答案