CIP2Aβcatenin和Cmyc在慢性粒细胞白血病中表达及意义.docVIP

CIP2Aβcatenin和Cmyc在慢性粒细胞白血病中表达及意义 　　【摘要】 目的 探讨蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子（CIP2A）在慢性粒细胞白血病（CML）中的表达及意义。方法 采用免疫组织化学SP法同时测定CIP2A、βcatenin和Cmyc在对照组和CML各期中的表达，并分析CIP2A、βcatenin和Cmyc表达的关系。结果 ①CIP2A、βcatenin和Cmyc在CMLAP/BP组的表达显著高于CMLCP组和对照组（P005），CIP2A、βcatenin和Cmyc在CML的表达均成正相关关系（P005）。②CIP2A在未缓解组的表达显著高于缓解组（P005）。结论 CIP2A高表达可能是CML发生急变的机制之一，这个过程可能是通过上调Cmyc实现的，而且CIP2A高表达与化疗疗效密切相关。 　　【关键词】 蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子；β连环蛋白；Cmyc；慢性粒细胞白血病；免疫组化 　　作者单位：473000 南阳医学高等专科学校第一附属医院血液科 慢性粒细胞白血病（chronic myeloid leukemia，CML）是起源于造血干细胞的恶性克隆性疾病，临床上分慢性期（chronic phase，CP）、加速期（accelerated phase，AP）和急变期（blastic phase，BP），一旦发生急变，患者往往在数月之内死亡，预后极差。Ph染色体的出现和BCR/ABL融合基因的形成是CML发生的重要机制。但是关于CML急变的机制目前仍不完全明确，探讨CML急变的机制对于改善疗效以及干预CML急变具有重要意义。蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子是最近被识别的一种癌蛋白[1]，在多种实体瘤中高表达并与恶性肿瘤的发生及转移浸润有关，然而关于CIP2A在CML中的研究很少。本研究采用免疫组化方法同时检测CIP2A、βcatenin和Cmyc在CML各期中的表达，初步探讨CIP2A在CML发病机制中的作用。 　　1 材料与方法 　　11 研究对象 参照张之南主编的《血液学诊断标准》[2]，46例CML患者为我院2008年7月至2012年6月门诊及住院患者：男27例，女19例，平均年龄447（1875）岁。慢性期31例（CMLCP组），加速期2例和急变期13例（CMLAP/BP组）， CMLAP/BP组15例化疗后完全缓解11例（缓解组）， 未缓解4例（未缓解组）。对照组为21例骨髓表现大致正常的非恶性血液病患者，其中男13例，女8例，平均年龄422（1971）岁。 　　12 检测方法及试剂 免疫细胞化学SP法检测骨髓单个核细胞（BMMNC）中CIP2A、βcatenin和Cmyc。CIP2A多克隆抗体为Santa Crus公司产品，βcatenin及Cmyc单克隆抗体、SP免疫标记试剂盒为北京中杉金桥生物技术有限公司产品。髂后或髂前上嵴穿刺取骨髓，用淋巴细胞分离液（比重1077）分离BMMNC并涂片，干燥后用新鲜配制的丙酮溶液于室温下固定30 min，用磷酸盐缓冲液（001 mol/L，pH74）漂洗3次；01%Triton100通透10 min，再用PBS漂洗3次，然后根据试剂说明书进行操作。每一批实验均设阳性及阴性对照，阳性对照采用胃癌切片（由试剂公司提供），阴性对照以PBS代替一抗。 　　13 结果判定 细胞质或细胞核出现棕黄色颗粒染色为阳性。综合考虑显色程度及阳性颗粒所占的面积：40倍显微镜下每张载玻片计数5个视野，每个视野计数100个细胞，取阳性细胞百分率的平均值作为该份标本的阳性细胞百分率计分，分值按75%分别计为0，1，2，3，4分；每个细胞按染色强度分不着色、淡黄色、棕黄色、棕褐色4个级别分别计为0，1，2，3分，算出总分除以500作为该份标本的平均显色程度；最后将两者分数相加，2分为阴性（），≥2分为（+）。 　　14 临床治疗方案 慢性期给予羟基脲控制白细胞，加速期和急变期联合应DA、HA（高三尖杉酯碱、阿糖胞苷）等方案化疗，疗效标准参照张之南主编的《血液学诊断标准》[2]。 　　15 统计学方法 所收集数据采用EXCEL2003建立数据表，导入SPSS 130统计软件进行统计学处理，计数资料比较采用检验，以P005为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　21 cIP2A、βcatenin和Cmyc在CML各期BMMNC的表达 CIP2A阳性产物呈棕黄色颗粒状定位于细胞浆，Cmyc阳性表达为棕黄色颗粒位于细胞核与细胞浆，CMLAP/BP组BMMNC中CIP2A和Cmyc蛋白阳性表达显著高于对照组（P005）；βcatenin在CMLAP/BP组中呈强阳性表达于胞浆和胞核，在CMLCP组和对照组呈弱阳性表达于胞浆，βcatenin在CMLAP/BP组的表达显著高于C